我的实验需要在外周血PBMC中,通过磁珠分选出154阳性细胞,但这个154阳性细胞比例较少,
日前的实验结果,在约10^7个PBMC中,最后获得阳选细胞约5万个,但上流式后死活染料显示70%以上是死细胞。分选前的样本检测发现活性在98%以上,但我的总体数目较多,这1~2%的死细胞总数加起来也不少,并且都染上了抗体结合上了磁珠,留到了最后。导致最后的目的细胞纯度堪忧。请问又怎样的解决办法吗,对于这个实验,请老师指教!
目前我有想到的解决方法,先用CD4磁珠分选一次(阴选),且154主要也是表达在CD4阳性细胞上,同时结合掉这些死细胞,然后再用154阳选一次。但实施一次后效果也很差,甚至不如直接154分选那次的结果,当然两次独立实验不是一个样本,且在别的文献中似乎也看到过阳选➕阴选的组合实验,所以我这个思路是否正确呢?
提到的文献:Balinas C, Nguyen T, Johnston S, Smith P, Staines D, Marshall-Gradisnik S. Investigation of mast cell toll-like receptor 3 in Chronic Fatigue Syndrome/Myalgic Encephalomyelitis and Systemic Mastocytosis using the novel application of autoMACS magnetic separation and flow cytometry. Asian Pac J Allergy Immunol. 2018 Dec;36(4):257-264. doi: 10.12932/AP-200517-0086. PMID: 29223146.