检测细菌表面蛋白

nqrls

请问倪老师 我想检测细菌表面的一个膜蛋白，蛋白表达丰度较低，是不是会导致阳性细胞群减少？而且FITC-A的负值也出现一个峰是为什么？是电压调的不对吗？

niwanmao

1、实验是单色还是多色？
2、FSC/SSC上，圈了活细菌还是圈了其它信号？

nqrls

niwanmao 发表于 2022-6-23 20:24
1、实验是单色还是多色？
2、FSC/SSC上，圈了活细菌还是圈了其它信号？

实验是单色 我是用FITC Goat anti mouse 结合一抗后进行的流式检测
FSC/SSC上圈的应该是全部细胞，去除了噪音

nqrls

您看调的对吗

risah

细菌直径较小，FSC、SSC需要改为log，另外，需要设置buffer对照管来确定P1门的界限。用阴性对照管来确定FITC阴性群界限

nqrls

risah 发表于 2022-6-24 10:51
细菌直径较小，FSC、SSC需要改为log，另外，需要设置buffer对照管来确定P1门的界限。用阴性对照管来确定FIT ...

我的p4门就是FITC阴性群，只是不清楚为什么会在FITC的负值出现一个峰

niwanmao

nqrls 发表于 2022-6-24 11:22
我的p4门就是FITC阴性群，只是不清楚为什么会在FITC的负值出现一个峰

P4门内这两群，分布在FSC/SSC的位置，是否相同？

risah

nqrls 发表于 2022-6-24 11:22
我的p4门就是FITC阴性群，只是不清楚为什么会在FITC的负值出现一个峰

因为你现在第一张图坐标轴设置不对，用了线性，因此P1门的框选不一定准确，可以圈正确后再用反设门看看负轴区域那群颗粒位于第一张图哪个位置，是否是碎片？

nqrls

niwanmao 发表于 2022-6-24 12:02
P4门内这两群，分布在FSC/SSC的位置，是否相同？

是相同的 我在发出来

nqrls

niwanmao 发表于 2022-6-24 12:02
P4门内这两群，分布在FSC/SSC的位置，是否相同？

这是我换成log后的图 P4门里的两群细胞在同一位置