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AML的多色MRD分析可重复性标准化模板

发布者: niwanmao | 发布时间: 2022-7-21 16:44| 查看数: 140| 评论数: 0|帖子模式

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多参数流式细胞术 (MFC) 检测到的可测量残留病灶 (MRD) 与 AML 患者的不良预后相关。目前国内不少医院和检测机构,已开始使用多色流式方案检测MRD,但对于AML,大家的分析或多或少都存在一定的分析者差异,需要通过分化轨迹判断,有一定主观性,较难实现可重复分析。

2022年7月18日,Leukemia杂志上发表的这篇文章,使用了简单且广泛使用的8色方案,但其特色在于使用了固定门的层级设门策略,将基于 LAIP 的DfN策略集成在设门中,实现了良好的可重复性。

具体步骤如下,我在图上加了几个箭头以便说明,简单介绍一下,作者将原始区域+单核区域圈起来之后,接着圈选CD33+和/或CD13+区域,所以第2步是一个倒L型门,再接着分出CD34+和CD34-两群(第3步的红色和蓝色),接着将这两群分别呈现在CD117/HLA-DR散点图上,用十字门分出四个不同表达的区域,如此形成了2×4=8个群体,这8个群体,我们可以理解为8个不同表达性质的原始细胞,接着对这8个群体分别评估其CD33、CD13的表达强度是否有缺失,CD7和CD56是否有伴随表达(需强调的是,CD33、CD13的缺失需要真正的阴性,而非弱表达;CD7和CD56的伴随表达需要强表达才比较可靠),这两方面特征分别对应第5和第6个小图上面的红色和蓝色门,如此8个群体×4个异常特征,就形成了最终我们要分析的32个亚群,这32个亚群的门固定下来之后,利用正常骨髓、CR的ALL患者骨髓、原发中枢神经系统淋巴瘤患者骨髓等​建立正常参考值范围。

测量值和参考值之间的差值反映了AML负荷(占CD45+ 细胞的百分比)。 所有存在CD13 或 CD33 缺失、CD7 或 CD56 的跨系表达的细胞群,如果表型的异常存在一致性,那么就可以加起来作为 MRD 水平。
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作者对诱导化疗后的246 名 AML 患者进行了监测,MRD+患者的总生存期较短(HR 3.8,p = 0.006),MRDneg 无反应者的总生存期与 MRDneg 反应者相当(有反应和无反应以形态学来评估)。 MRD 检测不同观察者之间可靠性很高,Krippendorffs α 为 0.860。随访时 MRD 分析的平均时间非常短,为 04:31 分钟。

因此,此单管多色流式方案+这种固定门分析MRD的标准化方式,大大提高了不同分析者之间的可靠性,加快了分析速度,可能为多中心MRD 评估提供基础。

信源:Röhnert MA, Kramer M, Schadt J, et al. Reproducible measurable residual disease detection by multiparametric flow cytometry in acute myeloid leukemia [published online ahead of print, 2022 Jul 18]. Leukemia. 2022;10.1038/s41375-022-01647-5. doi:10.1038/s41375-022-01647-5


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