流式细胞术和FISH结合检测端粒平均长度

2013-12-9 20:50| 发布者: niwanmao| 查看: 828| 评论: 0|原作者: niwanmao

摘要: 端粒是细胞衰老和一些癌症发病过程中起着重要作用。检测端粒平均长度有不少方法，其中Southern blot检测端粒末端限制性片段（TRF）仍是金标准。不过Southern blot的缺点就是耗费的时间和需要提取DNA，而且TRF与实际 ...

端粒是细胞衰老和一些癌症发病过程中起着重要作用。检测端粒平均长度有不少方法，其中Southern blot检测端粒末端限制性片段（TRF）仍是金标准。不过Southern blot的缺点就是耗费的时间和需要提取DNA，而且TRF与实际端粒重复序列起始位置的距离差异较大，故结果可能会有所偏差。Nature 2006年12月份的一篇protocol在flow FISH基础上开发出了端粒平均长度的检测方法，里面不但详细描述了实验步骤（文中检测了22例标本，分2－3天，合计12小时），并且也列出了一些注意点和flow FISH法的缺陷。方法适用于所有的商业化流式细胞仪，希望对做端粒研究的朋友有所帮助。

flow FISH分析示例，标本来自一名83岁正常供者的外周血有核细胞。c图是标本与多肽核酸（PNA）探针杂交，b图为相同标本没有与PNA探针杂交，相当于普通流式中的同型对照或阴性对照。a和d图中，可见细胞还同时染了DNA染料LDS751和各种抗体（CD45RA和CD20），以区分出不同的细胞亚群。g图是牛胸腺细胞、人淋巴细胞、人中性粒细胞、人CD20＋淋巴细胞的端粒长度分析图。