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[细胞增殖] CFSE检测T细胞增殖无子代峰

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 楼主| 发表于 2022-7-28 15:48:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 cczxgysl 于 2022-7-28 15:50 编辑

想请教老师一个问题,我用CFSE检测脾脏T细胞的增殖能力。先用CD3抗体37度包被98孔板3h,脾脏细胞裂红后染CFSE,加到96孔板,用CD28 IL2刺激72h后上机检测。上机的细胞活性大概是50%-60%.
这是染了死活后的CD45+CD8+圈门下的情况,请问是不是没有增殖峰?
黄色为未染CFSE样本,蓝色为未刺激的CFSE样本,红色为刺激后的CFSE样本

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发表于 2022-7-28 19:42:04 | 显示全部楼层
站内的CFSE帖子都看过了吗?
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 楼主| 发表于 2022-7-28 21:37:21 | 显示全部楼层
本帖最后由 cczxgysl 于 2022-7-28 21:39 编辑
niwanmao 发表于 2022-7-28 19:42
站内的CFSE帖子都看过了吗?

看过了老师,做之前每条帖子都看过好几遍,浓度也都是参照帖子和相关文献的,不知道是哪里出了问题。CFSE浓度做了0.5和1的,cd3是1ug/ml,cd28是5ug/ml,IL-2是10IU
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发表于 2022-7-28 21:39:40 | 显示全部楼层
cczxgysl 发表于 2022-7-28 21:37
看过了老师,做之前每条帖子都看过好几遍,浓度也都是参照帖子和相关文献的,不知道是哪里出了问题。 ...

如果CFSE浓度没问题,那么是否要从刺激方面去想办法,是否目前这个刺激方式效果不好,我记得是不是CD3/CD28 beads刺激更好一些?
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发表于 2022-8-1 17:10:26 | 显示全部楼层
CD3扣板和CD28游离的刺激方案是可以的,不过我们的做法和你有些不同,一是我们会先将脾脏中的T细胞纯化出来,二是我们不加IL-2,CD28用的是1ug/ml,CD3是3ug/ml

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发表于 2022-8-2 10:15:00 | 显示全部楼层
我们会用两种方式检测T细胞增殖1.ConA,2.CD3包被+游离CD28。
都是相通的步骤,磁珠分选出脾脏中的CD3+T细胞之后再去操作
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发表于 昨天 16:45 | 显示全部楼层
我和你刺激方法不同,是在培养基里面直接加CD3和CD28刺激小鼠脾脏;
但是结果和你一样,都是只有一个峰
我培养了4天。
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