脾脏细胞流式分析

ccx793244586

各位战友好，想请教一下如何进行少量细胞的流式分析。流式分析实验中一般推荐每管的细胞量1*10^6，但是一些原代细胞实验中细胞数量不高，加上进一步的不同实验分组处理，细胞数量达不到10^6，只有10^5级别，10^5进行流式实验也是可以做出来但本人由于流式过程中的细胞损失较高，因此仍未以10^5级别的细胞进行过。想请教大神，流式操作过程中有什么细节或者注意点可以减少细胞的损失，尤其是包含固定破膜的胞内细胞因子或核内转录因子染色的流式，十分感激！！

Climber

ccx793244586 发表于 2022-8-11 11:08
谢谢！ 我用的stain buffer也是PBS+2% FBS，请问您3*10^5细胞一般最后上机大概能有多少细胞呢？
因为最后 ...

上机时的细胞我们没有计算过，一般我们是CD4+ T细胞群收5000-10000个是没有什么问题，这样是能形成细胞群的，我觉得需要看你的目标细胞群

Climber

目前我们尝试过30万脾脏活细胞染Foxp3,10万个似乎有点困难，减少细胞损伤的方案可以用1xPBS里面加入2%BSA或者FBS，减少洗涤离心的次数，选用eppendorf的1.5mlEP管，上样前再换回流式管，但10万个细胞，可能上完整管样能记录到1000个CD4+ T细胞就不错了

ccx793244586

Climber 发表于 2022-8-8 18:01
目前我们尝试过30万脾脏活细胞染Foxp3,10万个似乎有点困难，减少细胞损伤的方案可以用1xPBS里面加入2%BSA或 ...

谢谢！ 我用的stain buffer也是PBS+2% FBS，请问您3*10^5细胞一般最后上机大概能有多少细胞呢？
因为最后多色流式分析的T细胞可能只占CD4+T细胞的几个百分点，所以担心上机数量少看不出来分群