求助关于CD138染色

Climber

    各位老师好，我最近在做浆细胞的流式分析，在测试的时候效果都还可以，用了BD的CD138-FITC，但是由于我的实验小鼠是带有GFP荧光的，恰好我仅有一个通道的CD138，于是购买了Invitrogen的CD138-PE，但是效果却出奇的差，我目前纠结的问题是通道变动原因导致的还是抗体本身的问题。

Climber

我想我应该能确定是抗体问题了，花了点时间对这个抗体做了稀释浓度的梯度测试，从0 200 400 800 1200 ，采用了APC-eflou780-CD45和CD138-PE（561激发）的无补偿方案，并关闭了未使用的通道，CD138-PE的效果依旧奇差，大家注意避免Invitrogen CD138-PE clone（300506） 这个克隆的抗体吧 有点坑 两千块钱打水漂了

Climber

本次所用的通道如下

niwanmao

Climber 发表于 2022-8-12 18:54
本次所用的通道如下

CD138 PE和CD19 PE-cy5.5、GFP三者之间的补偿，分别如何？

Climber

niwanmao 发表于 2022-8-13 10:04
CD138 PE和CD19 PE-cy5.5、GFP三者之间的补偿，分别如何？

我们这里PE是用561激发的，与PE-cy5,5有补偿但是很小并且补偿合适，GFP的通道这台仪器性能很好，与其他通道基本不存在补偿，补偿问题我排查过了 没有发现有啥问题

niwanmao

Climber 发表于 2022-8-13 11:26
我想我应该能确定是抗体问题了，花了点时间对这个抗体做了稀释浓度的梯度测试，从0 200 400 800 1200 ，采 ...

PE激发应该用488才对啊。561隔太远。

Climber

niwanmao 发表于 2022-8-13 15:56
PE激发应该用488才对啊。561隔太远。

PE 488和561都可以，用561的话可以规避PE和FITC的补偿。

niwanmao

Climber 发表于 2022-8-13 16:07
PE 488和561都可以，用561的话可以规避PE和FITC的补偿。

PE还是需要488激发的，561效果很差（跟PI不同）。你可以再试试。
目前绝大多数情况下，抗体出问题的概率还是比较低的。

Climber

niwanmao 发表于 2022-8-13 20:32
PE还是需要488激发的，561效果很差（跟PI不同）。你可以再试试。
目前绝大多数情况下，抗体出问题的概率还 ...

好的  那我再试试