mice Treg gate

hebiorange

B6 mice splenocyte, CD3,CD28 and IL-2 stimulate, detecte nTreg(CD4+CD25+Foxp3+) pSTAT5 signal.  发现， Foxp3+ 这一群 low CD25 expression, 不太对的感觉， 和我两次固定破膜有关系么？   Foxp3 staining follow eBiosience Foxp3 Transcription Factor Staining kit, and pSTAT5 staining follow 2% PFA fix and prechilled 90% methanol perm. Foxp3 and pSTAT5 FMO

hebiorange

还有一种， 是不是CD25 本来是连续表达， 然后 high 的这群 没有分的特别好？

niwanmao

hebiorange 发表于 2022-8-28 12:33
还有一种， 是不是CD25 本来是连续表达， 然后 high 的这群 没有分的特别好？ ...

CD25的分群基本上能分成这样差不多了。

Climber

一般来说诱导Treg还需要加TGF-b的吧，给个参考 我们做的是在CD3 CD28 IL-2 TGF-b下刺激5天的，细胞的话还是需要纯化一下naive 的CD4的，直接上脾脏细胞不太好，出来的效果的话基本上是CD25+ FOXP3+，如果无法找到最佳的一套固定打孔方案，可以先做一个FOXP3打孔，一般是只有CD25+ Foxp3+双阳的来证明CD25+的能代表Treg，然后做一个胞膜的CD4 CD25，用BD的磷酸化打孔方案看磷酸化的STAT5