数字与模拟

haven_t

由于接触两台流式都是 BD的，所以见解可能有失偏颇，忘高手指教。
先讲一个我的遭遇吧，当时有人来做一个巨核系的倍体分析，以CD61－FITC标记，pi染色，当时仪器是FACS VANTATE，上机时我有一个疑问，FITC要对数，PI要线性，这样子补偿是否有问题，上机后发现补偿真的很难调，好像总是调不好，没办法还是硬着头皮把样品上了。后来在一次聚会时问了一个级别比较高的技术支持，我把情况跟她说了后她觉得应该可以调，但是原因也说不清楚。后来我分析了下仪器的结构，终于了解了原因所在。

光信号在光电倍增管转换成了电信号，由于信号较低，必须经过放大电路，放大电路的调节在cellquest中是AMP，好像是2，4，8，16，LOG，前4个是线性放大器，最后就是我们最常用的对数放大器了。然后才经过数模转换卡，变为数字信号储存在电脑中。补偿在那里进行呢？我觉得是在光电倍增管与放大电路之间，因为如果在信号放大电路之后，如果放大器改变了，补偿也随之改变，原因与调整光电倍增管电压会影响补偿值是一样的，只要补偿前端改变，补偿就一定要改变。回到前面的问题，技术支持的回答是正确的，对数与线性并不影响补偿，甚至可以在对数调节好再调到线性。但我的猜测到底是否正确现在也无法印证了，希望大家有兴趣可以尝试一下，或者问一下工程师。

以上我说的就是模拟型的仪器，至于数字型似乎觉得很高级，在某种意义来说其实是阉割版。起码把对数放大器与补偿电路省了，那这两个工作由谁去承担呢？答案就是电脑。这种流式光电倍增管信号出来后经过处理，然后就进行数模转换，并储存在电脑中。补偿与对数转换就交由程序完成。所以这种流式所储存的数据是最原始的，并没有经过补偿，而且所有通道都是线性储存。当要进行分析作图时，程序会读取文件头的补偿信息进行补偿矩阵运算，然后做对数运算。所以这类型的仪器本来就是后补偿，自带的软件也带有此功能，大家可以在分析后随意调节补偿。

niwanmao

haven_t 发表于 2011-8-5 21:13

                               
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由于接触两台流式都是 BD的，所以见解可能有失偏颇，忘高手指教。
先讲一个我的遭遇吧，当时有人来做一个巨 ...

从仪器介绍上看，似乎基本上应该都是直接数字采集的。的确是可以咨询一下他们工程师，是否存在所谓模拟型的？

haven_t

采集肯定是数字的，两者区别主要是对数变换和补偿部分的处理方式是数字还是模拟，这个区别就很大了，编写程序也要注意甄别，因为仪器自带的软件一般着重考虑分析仪器自己获取的数据，第三方软件靠虑要更全面，需要兼容不同形式的数据是有难度的。我用过一个版本的 winlist，打开vantage的数据没有此问题，但打开canto的数据是没有任何补偿，可能因为它无法读取文件的补偿矩阵，但可以用winlist重新进行补偿调节。

chilliping

原来我现在用的都是数字型的仪器了，学习了！

gcz5340

haven_t兄对机器原理非常精通，十分佩服啊。我有一点不了解，请教一下：
我知道数字化的流式细胞仪就是PMT产生的信号不经过数模转换，直接进行数字化然后进行存贮。根据你的阐述，这些收集的是原始数据，是不带补偿信息的。那么像我们常用的BD机器，Aria、Canto用的都是Diva软件，这个软件是可以离线补偿，但这个离线仅限于收完数据之后，当电脑重启后就发现上次的数据就不允许调补偿了，我的问题是：1、像Aria、Canto、LSR这些机器都属于数字化的flow cytometer吗，2、为什么这些数据下次开机的时候就不能调补偿了，3数字化的flow cytometer的数据应该是可以使用线性和对数两种放大方式来显示，Diva好像也没有这个功能。

haven_t

gcz5340 发表于 2012-5-13 23:25

                               
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haven_t兄对机器原理非常精通，十分佩服啊。我有一点不了解，请教一下：
我知道数字化的流式细胞仪就是PMT ...

郭兄对分选也很精通啊:)，我所说的数模转换其实不是太正确，如果跟工程师说最好讲AD转换。
首先所有的流式细胞仪都要经过AD转换，因为PMT出来的是模拟信号，那天你也听BC工程师说了，还有期间还有放大器，然后才通过AD转换变成数字信号。所谓数字是相对于老式机器而言，把补偿和对数转换数字化。
1）您所说的三种应该都是数字型的。
2）DIVA我用得比较少，不是太熟悉，总是觉得里面的对话框和标签有点混乱。但要注意的是，要调节补偿一定要把数据所属的那个experiment打开才能调节，不知道您打开没有？
3）这个是可以的，不过Diva做得不太好，仅仅在获取的时候让您选择，但Diva不断有升级，功能也改进了，后期有没有做下去我也不敢肯定。但是我有一个折中的方法，就是获取时选择线性，如果需要看对数是就用双指数转换，但需要提醒的是电压可能需要稍稍调整。

niwanmao

haven_t 发表于 2012-5-14 08:54

                               
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郭兄对分选也很精通啊，我所说的数模转换其实不是太正确，如果跟工程师说最好讲AD转换。
首先所有的流 ...

AD应该＝模－数吧？

我总在想离线补偿是否能够真正反映真实情况？在线补偿调节和离线调节的原理是否相同？如果不同，那离线补偿调节不是就不准确了

gcz5340

你的一句“Diva对话框和标签有点混乱”提醒了我，我找了一下，diva确实可以关机后再补偿的，lin和log也可以互转。

因为我们上机调试的时候都是这样一个对话框调电压、补偿和阈值以及选择lin&log、H/W/A，关机后呢你再open experiment的时候这个框就是黑的，什么都不显示，所以我以前以为Diva关机后补偿都不能动了，惭愧呀。

gcz5340

haven_t 发表于 2012-5-14 08:54

                               
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郭兄对分选也很精通啊，我所说的数模转换其实不是太正确，如果跟工程师说最好讲AD转换。
首先所有的流 ...

然后我找了一下，DIVA还有一个这样的窗口，在这个窗口中呢补偿呢都是可以再调的，lin&log也可以再选择。

gcz5340

haven_t 发表于 2011-8-6 09:09

                               
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采集肯定是数字的，两者区别主要是对数变换和补偿部分的处理方式是数字还是模拟，这个区别就很大了，编写程 ...

FSC/SSC的lin转成log后细胞都跑到右上了，FITC/PE的log转成lin细胞全部缩进去了，却是如果选了双指数后lin/log互转他就不理你了。