找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 584|回复: 7

[流式相关软件] 艾森流式细胞仪阈值改变导致CBA标曲拟合不出来

[复制链接]
发表于 2022-10-27 16:13:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏3流星未解决
使用艾森流式细胞仪,电压不变,用阈值10000,上样CBA 标品,得到数值导出FCS,用FCAP分析和flowjo分析出MFI,在拟合都能得到很好的曲线。但是用阈值100000,上同一标品得到数值导出FCS,用FCAP分析和flowjo分析出MFI,在拟合不出标曲,即MFI不随浓度增高而升高。
但两种情况在艾森流式细胞仪上显示正常,MFI随浓度升高而升高,用期显示的MFI去拟合可得到很好的标曲
这是为什么呢?

在流式细胞仪beads 位置相同。


流式图位置-阈值10000

流式图位置-阈值10000

流式图位置-阈值100000

流式图位置-阈值100000

STD-阈值10000.rar

5.24 MB, 下载次数: 11

STD-阈值100000.rar

1.11 MB, 下载次数: 8

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2022-10-27 20:49:13 | 显示全部楼层
信号都没问题。
问题应该出在你上样的时候,不同浓度上反了。

阈值10000的,趋势不错,但最后625和1250这两管,肯定反掉了,因为625的反而荧光强度大于1250。只是因为其它点都是好的,所以不影响你最后的拟合。

而阈值100000,至少两个地方反了,第一个是10和20,第二个也是625和1250。多个点错乱,曲线肯定拟合不好。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-3-18 14:30:10 | 显示全部楼层
阈值设置100000拟合不起来的原因是因为你导出的数据与FCAP软件的兼容性差导致的。
你将安捷伦的数据导出时高级设置-参数设置由“自动”修改为“根据图”,然后导出FCS格式的数据就可以拟合了。
导出前确保所有样品荧光通道的坐标轴一致,并且最高浓度和最低浓度都在坐标轴范围内。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2024-6-22 11:54:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-10-27 20:49
信号都没问题。
问题应该出在你上样的时候,不同浓度上反了。

倪老师,能否请教个细胞因子的问题,一共是5个指标,A-D是一个试剂盒,E是单独试剂盒,第一次做的C0孔浓度还可以接受,A指标是15pg/ml左右,B-D都是在3pg/ml左右,E是0pg/ml。但是第二次做的C0孔,A是31,B是7,C是12,D是11,E是0.33,请问,
1为什么2次C0孔差异这么大?第一次是做了完整的标准曲线,第2次是只做了C0孔,用的是第一次的标曲曲线
2在确定PE电压的时候,用标曲最高浓度确定的,微球在PE的靠右侧了,如果降低PE的电压,是否第2次C0孔浓度就降低了?但是2次都是一样的电压条件,为何第一次的C0孔浓度没有那么高?
3如果想排除试剂或者操作的问题,想同时也去其他仪器上跑下这个实验,不同仪器上怎么具有可比性?因为PE电压不同,那么肯定C0孔电压又不同了。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-6-22 15:18:38 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2024-6-22 11:54
倪老师,能否请教个细胞因子的问题,一共是5个指标,A-D是一个试剂盒,E是单独试剂盒,第一次做的C0孔浓 ...

这里的描述我一下子难以读懂,但是同一样本不同试剂盒或者同一试剂盒不同时间产生差异,需从多方面找原因:
1、仪器稳定性,包括液路和电压,在某些仪器上会出现不同日期之间的漂移,需注意做好每日的质控和校准
2、样本是否存在降解?尤其是保存条件很重要
3、操作上,不要小看加样精度引起的差异
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2024-6-22 18:14:18 | 显示全部楼层
本帖最后由 wmj123456 于 2024-6-22 18:21 编辑
niwanmao 发表于 2024-6-22 15:18
这里的描述我一下子难以读懂,但是同一样本不同试剂盒或者同一试剂盒不同时间产生差异,需从多方面找原因 ...

倪老师,这里不牵涉样本,2次做的是标准品的C0孔,用的是同一个试剂盒,都是一样的试剂,一样的操作。区别在于第2次的PE荧光强度增加了,所以浓度也增加了。

如果排除掉实验操作的问题,可能是仪器每天的状态不稳定导致的把
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-6-23 10:09:34 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2024-6-22 18:14
倪老师,这里不牵涉样本,2次做的是标准品的C0孔,用的是同一个试剂盒,都是一样的试剂,一样的操作。区别 ...

如能确保加样精度上没问题,暂时考虑仪器的液路可能
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-6-28 16:03:24 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2024-6-22 18:14
倪老师,这里不牵涉样本,2次做的是标准品的C0孔,用的是同一个试剂盒,都是一样的试剂,一样的操作。区别 ...

你可以拉个双参图看看,横坐标改成time,看看液路是不是连续的,如果中间有断开可能是有气泡,有时候液路里面有气泡也会导致两次结果有差异的
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-7-15 04:09

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表