小鼠外周血PBMC提取

CRP

请问各位老师：
              我需要分离小鼠的淋巴细胞，先提取PBMC，脾脏和外周血都做，脾脏没有问题，而外周血就很麻烦，我是一般是摘眼球取2只c57bl/6小鼠的血，但一般也就1.5ml左右，提取的PBMC很少，实验不够用？请问如果想多取血的话，一般用什么方法取血？最多可以取多少血？这些血可以拿到多少PBMC？麻烦有经验的老师或战友分享一下。

niwanmao

CRP 发表于 2011-8-9 15:39

                               
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请问各位老师：
              我需要分离小鼠的淋巴细胞，先提取PBMC，脾脏和外周血都做，脾脏没有问题， ...

请做过的朋友发表点意见。
我通过搜索帮你找了资料，你看看是否有用：
1、purdue上一个人同样的问题，有人回复道：
Hi,
try Histopaque-1083 from Sigma (Cat # 1083-1).
Set the rotor brake on the centrifuge to the lowest level
2、参考相关文献的方法学部分：Whole blood from mice collected by heart puncture bleeds into EDTA vacutainer tubes. PBMC are separated from whole blood by density gradient centrifugation using 1-Step (Accurate Chemical & Scientific)
http://www.jimmunol.org/content/177/10/6584.full.pdf

CRP

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恩，谢谢，用的试剂都是一样的，呵呵

CRP

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您好，请问我用的是柠檬酸钠作为抗凝剂，应该没有什么问题吧！

chujindong

PBMC的数量确实不多，如果是人的话还可以根据正常范围计算一下，但实际中能够获得的量也是远少于理论量。老鼠的细胞比例是多少不知道，但1.5ml的血确实很少，提出的细胞少是很正常的吧。站内有做过老鼠PBMC的，可以咨询一下。抗凝剂的问题不大，个人认为可以不考虑这一点。

CRP

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好的，谢谢

niwanmao

CRP 发表于 2011-8-9 17:55

                               
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您好，请问我用的是柠檬酸钠作为抗凝剂，应该没有什么问题吧！ ...

抗凝剂不是影响因素。
你有没有试过第一种解决方案，改用Histopaque-1083 from Sigma (Cat # 1083-1)

CRP

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我用的就是这个试剂，估计是拿到的血太少了，想多杀几只小鼠看看。

niwanmao

CRP 发表于 2011-8-10 14:00

                               
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我用的就是这个试剂，估计是拿到的血太少了，想多杀几只小鼠看看。 ...

嗯，那只能多杀生了

小憨

又把老帖子翻出来问问，嘻嘻~

我也是做了好几次外周血，结果不太好，遇到点小问题，求教。

1. 因为我分血细胞是要进行培养而不是直接流式检测，所以在查资料时发现枸橼酸钠对细胞损伤小，所以就选了它当抗凝剂。但是在实际操作中有些问题，就是小鼠采血量不太稳定，有的时候采的多有的时候采的少，又不能先采血后加抗凝，只能按过量加，过量加的后果就是会造成渗透压太大，细胞皱缩，反而细胞状态不好了。

2. EDTA抗凝是真心不好用啊，都溶血了感觉，而且也是有上面说的问题。

所以我还是想跟大家探讨一下，看有没有哪位大神能提供比较周全的小鼠外周血细胞的分离方法。另问：心脏采血能算外周血么？