同型对照的原理

wmj123456

倪老师，同型对照是阴性对照，不会和靶标特异性结合，那请问下，为什么不会和靶标结合？因为搜到了一种说法，是由于同型对照抗体的Fab段结合的抗原是很稀有的抗原，因为不会和目标抗原结合.我附上资料的原文。那请问目前市面上的Isotype control，还有其他的种类的吗，还有哪些原因不会与靶标特异性结合呢？Isotype controls match the test/primary antibody characteristics, but are raised against antigens not found in common preclinical species; this means that isotype controls lack specificity for the target antigen. In both in vivo and in vitro assays, a signal can result from various binding events

niwanmao

以前，确实大家都是拿同型对照作为设门的阴性对照，因为之前几乎都是单色或双色流式，并且抗体种类比较单一（基本上都是IgG和IgM）。所以同型对照这种结构和靶抗体结构相似，但缺少特异性结合的抗体（即缺少了与靶抗原结合的特异性构象），是足够反映背景的。

但实际上，随着多色流式的发展，荧光渗漏导致的背景增高，并且抗体种类的增多，发现除了荧光渗漏之外，还得排除Fc受体导致的非特异性结合背景，因此现在Fc Block+ FMO 对照，成了主流的设门参照。 同型对照慢慢淡出历史舞台。