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[淋巴细胞相关] PBMC破膜后CD56指标出现差异

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 楼主| 发表于 2023-1-13 10:41:54 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
    最近在做一个实验,大概是用IL2刺激人PBMC后,检测人PBMC中NK细胞的STAT5磷酸化程度。

    我这边使用的是Perm BufferIII进行透膜检测细胞中STAT5,使用BD的  BV421 Mouse Anti-Human CD56(NCAM16.2 )标CD56.
    现在出现的问题是,PBMC不透膜,CD56的分群非常好,但是固定透膜后,CD56基本上无法分开。
    站内有没有大神有过相关经验,或者通过哪些角度进行改进
    谢谢


不透膜

不透膜

不透膜


透膜

透膜

透膜
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发表于 2023-1-13 12:58:52 | 显示全部楼层
FSC和SSC散点图比对一下,可能细胞都碎了。

有没有事先用BD Phosflow™ Fix Buffer I 固定?
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 楼主| 发表于 2023-1-13 14:53:25 | 显示全部楼层
谢谢老师回复
透膜的细胞是固定过的。
FSC和SSC散点图对比过,相同电压下细胞位置相同。
然后我用CD3和CD56标NK细胞,CD3的分群在透膜前后是没有问题的,仅CD56出现较大差异。
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发表于 2023-1-13 15:27:42 | 显示全部楼层
有没有可能跟CD56识别的位点有关系?它比较适合表面的染色,不太适合胞内染色?我只听说过CD3有这种表面和胞内染的,但是还没听过CD56也有。只是我个人的想法
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 楼主| 发表于 2023-1-13 15:31:31 | 显示全部楼层
谢谢回复
CD56胞内染色肯定是可以的
不过我也觉得是识别位点被破坏了,所以我正在寻找新的克隆号的anti-CD56的抗体
不知您那边是否有相关经验,哪个克隆号比较合适
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