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[细胞增殖] 分析T细胞增殖的时候,是否需要去除死细胞

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发表于 2023-1-16 11:24:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
实验流程是分选出来的T细胞染CFSE,用CD3/CD28 Dynabeads活化3天后收集细胞,上机检测之前只染了L/D(细胞活率接近90%)。


实验数据正常,但是在分析的时候有点疑惑,多数人是从single cells里面先圈出活细胞,然后得出活细胞中的增殖比例;
但是由于死细胞多数都是原代细胞,那么去除死细胞的话,T细胞增殖比例还准确吗?

为什么不能直接从single cells里面分析T细胞增殖呢。




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发表于 2023-1-16 12:15:28 | 显示全部楼层
死细胞究竟是哪一代,应该不好确定,而且死了之后,染料是也存在外漏的可能。

只有活细胞才是真实的。
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 楼主| 发表于 2023-1-16 13:12:13 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-1-16 12:15
死细胞究竟是哪一代,应该不好确定,而且死了之后,染料是也存在外漏的可能。

只有活细胞才是真实的。

谢谢倪老师的解答,我理解了。
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发表于 2023-1-29 22:20:00 | 显示全部楼层
倪老师,死细胞应该不会增殖吧?所以看死细胞的意义不大,只能圈出活细胞看增殖。这种解释合理吗
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发表于 2023-1-30 07:48:48 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-1-29 22:20
倪老师,死细胞应该不会增殖吧?所以看死细胞的意义不大,只能圈出活细胞看增殖。这种解释合理吗 ...

嗯,死细胞确实不会增殖,理论上停留在死亡的那个代数,但是究竟其死在哪一代,死亡后染料外漏是否会导致误判为下一代,都是变数。所以多种因素综合,需要排除死细胞。
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发表于 2023-6-5 15:54:01 | 显示全部楼层
您好,我想请教下你分选用的也是磁珠吗?CD3/CD28 Dynabeads好用吗?
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发表于 2023-8-27 12:04:56 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-1-30 07:48
嗯,死细胞确实不会增殖,理论上停留在死亡的那个代数,但是究竟其死在哪一代,死亡后染料外漏是否会导致 ...

老师,说到死细胞,我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后,用死活染了看都不剩什么活细胞了,这正常吗,而且把仅剩的活细胞圈出来的CFSE还能当做第一代峰的对照吗
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发表于 2023-8-27 15:32:37 | 显示全部楼层
462868793 发表于 2023-8-27 12:04
老师,说到死细胞,我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后,用死活染了看都不剩什么活细胞 ...

不刺激的话,淋巴细胞容易凋亡,在细胞状态欠佳的时候,做功能学试验,不太建议。
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发表于 2023-8-30 16:40:40 | 显示全部楼层
462868793 发表于 2023-8-27 12:04
老师,说到死细胞,我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后,用死活染了看都不剩什么活细胞 ...

找你这个处理,还不如直接拿新鲜的初代当对照。。。
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