荧光补偿

tangxun

一个困惑多年没好意思问的问题多色流式调节补偿时，Diva上是按照一个百分比来调节的，有时会出现超过100%的补偿，这是什么含义呢？此外这个补偿值有什么合理区间吗？ 比如不大于多少之类的。

Climber

我的理解是补偿值超过100意味着目标通道的荧光强度甚至低于其他通道渗漏给目标通道的荧光强度，这个时候说明电压给的不太合适，可以适当增加目标通道的电压，降低其他渗漏通道的电压，一般来说补偿值越小是越合适的，我的个人习惯是一些特别临近的通道不要超过50，太大补偿值的话我一般会重新调补偿，个人愚见，敬请指正

niwanmao

spillover，是可以超过100的，只是过大的spillover，意味着两个通道之间的渗漏过于明显，容易对弱阳性结果产生极大的干扰，故不推荐使用。
具体大于多少不可用，需结合目的抗原的表达强度和表达量。

tangxun

Climber 发表于 2023-2-4 09:09
我的理解是补偿值超过100意味着目标通道的荧光强度甚至低于其他通道渗漏给目标通道的荧光强度，这个时候说 ...

多谢，就是也存在另一个现象，APC和APC R700，我在发现APC R700有大量APC溢漏时，增加APC R700电压，减少APC电压，溢漏反而更严重了

niwanmao

tangxun 发表于 2023-2-6 08:57
多谢，就是也存在另一个现象，APC和APC R700，我在发现APC R700有大量APC溢漏时，增加APC R700电压，减少 ...

电压是会影响渗漏，所以需要先根据质控微球或滴定情况，确认最佳电压，然后电压就得固定下来，再调节补偿。