流式细胞仪的多色原理

ppaa

小白一个，看到不同的激光器的滤光片有相同的，比较疑惑，但查到资料发现这些激光器并不是在同一光路上，而是空间上分开的，这样就可以做到不会相互干扰，但此时会有一个问题，因为存在空间上的距离，不同的激光是在不同的时间打在细胞上的，怎么把不同的激光的荧光数据整合到一个细胞上呢？会不会出现有错位的情况呢？有哪位大佬能够解决一下困惑，谢谢！

niwanmao

因为是单细胞排列通过，所以这个时差，计算机会控制好关联的。

ppaa

niwanmao 发表于 2023-3-3 10:06
因为是单细胞排列通过，所以这个时差，计算机会控制好关联的。

我觉得奇怪的是，因为是短波长用于前散射和侧散射的，那长波长的激光如果没有检测到荧光信号，那他怎么知道是有细胞通过了呢？1982年的一篇文献里就讲到了这个方法，真是厉害。

niwanmao

ppaa 发表于 2023-3-3 10:21
我觉得奇怪的是，因为是短波长用于前散射和侧散射的，那长波长的激光如果没有检测到荧光信号，那他怎么知 ...

因为单细胞通过是可控的、可预测的，所以你所担心的，都不是问题。

也正是如此，所以低速的结果CV会更好一些。


关于帖子中的图片，以后请通过发帖时（高级模式编辑器）的工具栏上传图片，不能直接拖进编辑器。直接拖进去的图片，只是一串十六进制，无法正常显示。

ppaa

niwanmao 发表于 2023-3-3 15:06
因为单细胞通过是可控的、可预测的，所以你所担心的，都不是问题。

也正是如此，所以低速的结果CV会更好 ...

多谢版大答疑

myy559

从理论上来说，不同激光照射到同一个细胞在时间上确实存在这样一个“延迟”，但是这个“延迟”是可以被软件or仪器计算出来，从而可以将不同激光产生的信号统计到同一个细胞上。

丹丹Lisa

ppaa 发表于 2023-3-3 10:21
我觉得奇怪的是，因为是短波长用于前散射和侧散射的，那长波长的激光如果没有检测到荧光信号，那他怎么知 ...

有无细胞通过，是通过前向散射光信号FSC和侧向散射光信号SSC来鉴别的，散射光信号是激光打在细胞上发生偏转产生的信号，FSC在激光的方向上接收，和细胞大小有关；SSC在与激光垂直的方向上接收，和细胞形态和内部物颗粒度有关；它们都属于细胞本身固有的信号，和有无荧光信号没有关系。一般用488nm激光器来激发FSC和SSC。