做小鼠Foxp3的时候，固定剂的成分是什么

魂断蓝桥

1、做小鼠Foxp-3的时候，使用过不同的固定通透剂，都做不出来信号。使用商业化的True-Nuclear™ Transcription Factor Buffer Set。一下就做出来了。不知道他里面是什么有效成分。
2、组合一：4%PFA+90%甲醇。组合二：4%PFA+0.1%Triton X-100。组合三：4%PFA+皂苷。组合四：80%乙醇。这些都做不出来Foxp3这个靶点。
3、还有什么其他的固定通透的方法吗？

niwanmao

商品化的转录因子试剂盒，成份我们是不知道的。
第2点提到的这三个组合成份，第1个甲醇大多用于磷酸化蛋白检测，第2、3的破膜效果很差，只能破到胞膜，无法破核膜，所以无法检测。

魂断蓝桥

niwanmao 发表于 2023-4-25 16:36
商品化的转录因子试剂盒，成份我们是不知道的。
第2点提到的这三个组合成份，第1个甲醇大多用于磷酸化蛋白 ...

商业化的转录因子试剂盒开发出来之前，是用啥方法测的Foxp3呢？找了一圈发现，Foxp3的结果都是用商品化的试剂盒做的。

niwanmao

魂断蓝桥 发表于 2023-4-26 15:30
商业化的转录因子试剂盒开发出来之前，是用啥方法测的Foxp3呢？找了一圈发现，Foxp3的结果都是用商品化的 ...

因为Treg是肯定存在的，所以是通过判断染色分群效果确定的。

魂断蓝桥

niwanmao 发表于 2023-4-26 16:46
因为Treg是肯定存在的，所以是通过判断染色分群效果确定的。

难怪，谢谢倪老师。有没有其他固定方法可以尝试呢？

niwanmao

魂断蓝桥 发表于 2023-4-26 16:52
难怪，谢谢倪老师。有没有其他固定方法可以尝试呢？

固定剂2~4％多聚甲醛就足够了。

至于破膜剂，根据 Cell Signaling Technology¹ 和 Novus Biologicals² 公开的资料，用于核内染色的破膜成份可用：
0.5% Triton X-100，0.2 µg/ml EDTA， 1% BSA ，用PBS配制

仅供参考。

信源：
General Intracellular Nuclear Target Flow Protocol - Novus Biologicals. https://www.novusbio.com/support ... rget-flow-protocol.
Nuclear Permeabilization Staining | Cell Signaling Technology. https://www.cellsignal.com/learn ... ar-permabilization.

魂断蓝桥

niwanmao 发表于 2023-4-27 07:36
固定剂2~4％多聚甲醛就足够了。

至于破膜剂，根据 Cell Signaling Technology¹ 和 Novus Biologicals²  ...

好的，谢谢倪老师