补偿调节

wmj123456

请教下，方案里做了4个荧光通道，分别是PE，APC，APCCY7，PB450（染的DAPI），先用单染管调节补偿，在用APCCY7单染管，调节对其他通道的补偿时，APC-APCCY7后，G5-3和G5-4门在APC轴上的mean值相差很大（通常在调节补偿的时候，如果他俩的mean值接近，我会认为APC和APCCY7的补偿的调节好了）。APC和APCCY7散点图象限的右上边即G5-2门总是有一群细胞，这群细胞也出现在G7和G4-4中，请问是什么原因？

wxd

把PB450的坐标轴负值调小一点，不要在PB450通道减去APC-Cy7的补偿，这样APC-Cy7/PB450坐标系中的补偿不会很奇怪。至于你说的“APC和APC-Cy7散点图象限的右上边即G5-2门总是有一群细胞，这群细胞也出现在G7和G4-4中”，可能是你的细胞确实表达APC-Cy7所标记的检测指标，但是APC-Cy7抗体没保存好，解耦连了，导致APC-Cy7标记的细胞也有APC通道的信号。

wmj123456

wxd 发表于 2023-4-28 20:22
把PB450的坐标轴负值调小一点，不要在PB450通道减去APC-Cy7的补偿，这样APC-Cy7/PB450坐标系中的补偿不会很 ...

PB450和APCCY7通道应该没有补偿的吧，我上面的图中没有调节他俩的补偿。只调节了APC和APCCY7的补偿，现在成这样了。G5-2的细胞还是有，所以很大可能性是APCCY7抗体解偶联的原因了？

wmj123456

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-4-28 22:06

APC-APCcy7的补偿设置了多少？
这个图形暂时不考虑降解，而是考虑是仪器（噪音？）或样本问题（这里的碎片信号也特别多）。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-4-29 09:37
APC-APCcy7的补偿设置了多少？
这个图形暂时不考虑降解，而是考虑是仪器（噪音？）或样本问题（这里的碎 ...

第二张图的补偿值是25.9。如果是降解，是怎么样的情况？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-4-29 16:01
第二张图的补偿值是25.9。如果是降解，是怎么样的情况？

降解后，原通道几乎不大有荧光。
我的建议是，你再重复两次，如果依然如此，可能得做单标确认。