找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 397|回复: 9

[白血病免疫分型] 血液病的panel搭配

[复制链接]
发表于 2023-5-25 17:17:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
倪老师,你好,想了解下临床中用流式诊断白血病,骨髓瘤及白血病微小残留等的大致流程?是先做初筛,然后加做几种方案进行确诊吗?针对每一种疾病,每次做的panel是固定的吗?还是根据实际情况进行调整,加做的方案会进行相应的调整?


看了一些资料,一些技术服务的公司是给的固定的panel的方案,也有一些书籍讲到哪些marker在某群细胞中表达的比例高低,以及表达的特异性,也有一些方案。但是不太理解这些方案是不是可以直接套用。希望得到倪老师的帮助。

流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2023-5-26 12:29:20 | 显示全部楼层
还有一个问题,如果我们的仪器现在做9色,13色的免疫细胞亚群的方案,结果还行,补偿没有那么难调节,如果做白血病的在其他仪器上验证过的10色左右的方案,补偿是不是也可以调的可以?之前接触白血病的比较少,不太清楚它跟普通的淋巴细胞亚群检测的差异有多大。非常希望有经验的老师可以帮忙回答下问题。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2023-5-28 08:48:46 | 显示全部楼层
1、公司的Panel可参考,大多是为了他们自有的抗体而设计的。
2、书籍上的方案,看编辑者,一般也建议通过原理上去看看是否可参考。

每个人会有自己的思维习惯,但大体上不会相差太大。

白血病方案,比淋巴亚群复杂,会涉及到一些抗体的荧光素搭配优化(有些荧光素搭配在一起有很大的Spreading Erro,需要避免)、抗体的克隆号问题(有些抗体染色效果不好)。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2023-5-28 22:43:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-5-28 08:48
1、公司的Panel可参考,大多是为了他们自有的抗体而设计的。
2、书籍上的方案,看编辑者,一般也建议通过原 ...

谢谢倪老师的回复。我是理解是,如果一个血液病的10色方案在其他仪器如BD上面是已经比较成熟了,然后再搬到其他的仪器上面做,理论上也是可以做出来的了?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2023-5-29 14:06:39 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-5-28 22:43
谢谢倪老师的回复。我是理解是,如果一个血液病的10色方案在其他仪器如BD上面是已经比较成熟了,然后再搬 ...

可以。但是分群性能,还是跟仪器会有关系。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2023-7-11 22:20:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-5-29 14:06
可以。但是分群性能,还是跟仪器会有关系。

倪老师,关于血液病的方案,最近在初步学习,简单总结了下,还有一些暂时不太理解的内容,能帮忙解答下吗?如下图,是用CD45和ssc设门的流式图,我们主要是看blast细胞的,先进行初筛,看是ALL-T,ALL-B,还是AML。通常是胞内染色CD3,CD79a和MPO,对应前面的3类分型。然后再加一些非系列特异性的指标如CD34,HLA-DR。
有几个问题:
1cCD3,cCD79a,cMPO这3个指标都是胞内染色的吧?是根据它们在细胞上的表达位置(CD3和CD79a算是膜蛋白吧),还是由于是做血液病,为了检测胞质内的表达,所以才胞内染色的?通常这3个指标的阳性比例大于多少,就可以初步确实是哪种系别?
2 加非系统特异性指标CD34和HLA-DR的目的是什么?
3cCD79a是初筛的,在ALL-B中表达比例高,您有见过CD79a和CD3共表达的情况吗?
4通过看CD3-CD19+和CD79a都可以来判断白血病细胞上B细胞的表达吧?

5正常病人的骨髓中,blast细胞的比例的范围有吗?
血液病.jpg
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2023-7-16 22:10:47 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-7-11 22:20
倪老师,关于血液病的方案,最近在初步学习,简单总结了下,还有一些暂时不太理解的内容,能帮忙解答下吗 ...

倪老师,这个问题是问的太基础了嘛?您有时间方便回答下吗?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2023-7-17 07:26:58 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-7-11 22:20
倪老师,关于血液病的方案,最近在初步学习,简单总结了下,还有一些暂时不太理解的内容,能帮忙解答下吗 ...

不好意思,之前没关注到这些问题。
1、cCD3,cCD79a,cMPO都是胞内,CD3是跨膜分子,表面和胞内均有结合位点,但在白血病时,有些患者CD3分子开始出现了,但未表达到胞膜,故需进行破膜染色。其它两个分子结合位点均为胞内。  阳性标准目前WHO是定义为10%。  决定系列是一个逻辑性的问题,WHO对于混合白血病系列有个标准,你可用WHO为关键词搜索一下站内帖。

2、34和HLA-DR是最常见的判断原始细胞的标志之二,此外,HLA-DR还具有判断T细胞活化、判断B细胞等作用。

3、我暂时未见到cCD79a和cCD3共表达的情况,可见到两者弱表达,此时是无系列指向性的。

4、判断系列,同第1点,对抗原表达强度有要求,可见WHO相关帖。

5、正常人骨髓中那些严格来说,不叫blast,建议叫髓系祖细胞、B系祖细胞等名词更好。髓系祖细胞一般在2%以下。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2023-8-1 11:39:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-7-17 07:26
不好意思,之前没关注到这些问题。
1、cCD3,cCD79a,cMPO都是胞内,CD3是跨膜分子,表面和胞内均有结合位 ...

倪老师,我想请教下,做血液病免疫分型时,在CD45和SSC分析的时候,通常是看淋巴,单核,粒,原始细胞和有核红,有时候不太知道如何区分粒细胞和原始细胞,这块能否给些经验?第二个panel里染了CD15,可以通过这个指标来确定粒细胞的位置吗?譬如下面的图,横坐标是SSC,纵坐标是CD45。第二张图最右上角也有一群细胞,这群细胞通常是什么细胞?
CD45和SSC.png
CD45和SSC-1.png
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2023-8-1 21:29:45 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-8-1 11:39
倪老师,我想请教下,做血液病免疫分型时,在CD45和SSC分析的时候,通常是看淋巴,单核,粒,原始细胞和 ...

中性粒细胞和原始细胞没分开,可能还是你的染色问题,裂解液影响了中性粒细胞的SSC。

大多数情况下中性粒和原始分得比较好,在部分分化的AML或早幼粒时,会发生重叠,但117、33、13、16等标记均能使他们分开。

第二幅图那些细胞是非特异性的。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2|浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-4-23 02:42

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表