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[结构和原理] CART制备后上样检测,FSC-SSC左下角的杂质和碎片都能被死活染料着色吗?

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发表于 2023-6-1 21:14:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
请问一下各位老师:

样本中的杂质和碎片都会被死活染料着色吗?用的染料为zombie(选用的APC-Cy7通道检测)
老师告诉我FSC-SSC左下角的碎片和杂质都会被死活染料着色,出现阳性的信号;但是我染色出来是左下角的杂质和碎片只有一小部分是阳性(APC-Cy7),这是怎么回事呢(如图)?

FSC-SSC 左下角箭头处杂质碎片,部分对应另一图中的左下角

FSC-SSC 左下角箭头处杂质碎片,部分对应另一图中的左下角

左下角那群来自第一幅图左下角箭头处

左下角那群来自第一幅图左下角箭头处
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2023-6-2 16:42:50 | 显示全部楼层
zombie染料和细胞表面以及膜内的游离胺结合,产生荧光。
这部分没染上的碎片可能没有或者结构破坏了?
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发表于 2023-6-3 10:33:54 | 显示全部楼层
这个是有点意思,有点奇怪,考虑如果膜结构破坏产生更多的自由基及胺基应该背景更高才对。没染上的话左下角的胞内没有胺基?还是说处理的时候直接把伯胺氧化没了?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2023-6-3 20:54:50 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2023-6-3 10:33
这个是有点意思,有点奇怪,考虑如果膜结构破坏产生更多的自由基及胺基应该背景更高才对。没染上的话左下角 ...

应跟自由基无关。跟胺类反应。

左下角的碎片,从染色结果看,可能不一定是细胞碎片,至少是不含胺类的。
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 楼主| 发表于 2023-6-12 16:26:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-6-3 20:54
应跟自由基无关。跟胺类反应。

左下角的碎片,从染色结果看,可能不一定是细胞碎片,至少是不含胺类的。 ...

那如果要第一张图要圈细胞的话,是否应该把左下角也圈进去呢?
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发表于 2023-6-12 17:03:19 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2023-6-12 16:26
那如果要第一张图要圈细胞的话,是否应该把左下角也圈进去呢?

已明确是碎片了,还是排除掉吧。
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 楼主| 发表于 2023-6-19 10:37:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-6-12 17:03
已明确是碎片了,还是排除掉吧。

就是想知道左下角那一群,理论上来说是否会被死活染料染上色,从而表现出相应通道的阳性?
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发表于 2023-6-20 09:00:41 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2023-6-19 10:37
就是想知道左下角那一群,理论上来说是否会被死活染料染上色,从而表现出相应通道的阳性? ...

Zombie、live/dead都是需要膜存在蛋白质成份才能结合。活细胞表面蛋白暴露较少,死细胞胞膜、胞内大量蛋白可结合,故荧光强度高。

至于碎片,我相信,蛋白质即使有也是微乎其微了,荧光弱/阴应该才是正常的。
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 楼主| 发表于 2023-6-24 23:03:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-6-20 09:00
Zombie、live/dead都是需要膜存在蛋白质成份才能结合。活细胞表面蛋白暴露较少,死细胞胞膜、胞内大量蛋 ...

明白,谢谢老师
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发表于 2023-11-17 19:11:52 | 显示全部楼层
我得也是这样,我是都圈上了,然后圈活死。
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