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[细胞因子检测] 我的IL17染上了吗

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发表于 2023-7-3 00:23:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 lukequ 于 2023-7-3 01:37 编辑

染的TH17,FC阻断后加死活:APC-CY7,然后FITC-CD4,固定 破膜后pacifi blue-IL17.

样本一FMO对照

样本一FMO对照

样本一IL17

样本一IL17

样本二FMO

样本二FMO

样本二IL17

样本二IL17

原始数据.rar

5.28 MB, 下载次数: 6

FCS文件

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2023-7-3 00:24:45 | 显示全部楼层
标本是小鼠脾脏研磨后淋巴细胞分离液分离
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2023-7-3 08:40:47 | 显示全部楼层
lukequ 发表于 2023-7-3 00:24
标本是小鼠脾脏研磨后淋巴细胞分离液分离

1、建议以后养成好习惯,每个通道都标上抗体名称,否则其它人帮你看问题很累 。
2、设门顺序,请改为先R4,再R4门内看IL17表达。

目前粗看,似乎没有染上或者没有刺激出来,刺激条件是什么样的?
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 楼主| 发表于 2023-7-3 13:43:05 | 显示全部楼层
本帖最后由 lukequ 于 2023-7-3 13:44 编辑
niwanmao 发表于 2023-7-3 08:40
1、建议以后养成好习惯,每个通道都标上抗体名称,否则其它人帮你看问题很累 。
2、设门顺序,请改为先R4 ...


怎么看没有染上,从图像形状看没有染色吗,刺激用BD的BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™,目录编号:550583,说明书:The Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™ is a ready -to-use polyclonal cell activation mixture containing the phorbol ester, PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate), a calcium ionophore (Ionomycin) and the protein transport inhibitor BD GolgiPlug™ (Brefeldin A).
刺激4.5小时,每200万细胞用3ul。
老师下次把抗体名称标上。
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 楼主| 发表于 2023-7-3 14:01:00 | 显示全部楼层
老师是这样设门吗
il17.jpg
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发表于 2023-7-3 14:01:04 | 显示全部楼层
lukequ 发表于 2023-7-3 13:43
怎么看没有染上,从图像形状看没有染色吗,刺激用BD的BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, w ...

看使用的试剂,应该是没有问题的,破膜的效果是否验证过,如果验证过的话,可能是真这么低吧。
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 楼主| 发表于 2023-7-3 14:06:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-7-3 14:01
看使用的试剂,应该是没有问题的,破膜的效果是否验证过,如果验证过的话,可能是真这么低吧。 ...

破膜也是用BD的BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit,但以前用过胞内染色也没有分群明显,不懂破膜剂有没有问题。我想弄一下未刺激的细胞为生物学对照,和刺激的对比,这样可以明确是否染上吧。
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 楼主| 发表于 2023-7-14 12:23:42 | 显示全部楼层
lukequ 发表于 2023-7-3 14:06
破膜也是用BD的BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit,但以前用过胞内染色也没有分群明 ...

看这应该是染上了,感觉效果还行

刺激后

刺激后

刺激前

刺激前
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发表于 2024-6-4 16:41:35 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-7-3 14:01
看使用的试剂,应该是没有问题的,破膜的效果是否验证过,如果验证过的话,可能是真这么低吧。 ...

人的IL17表达大概在1%,他这个结果蛮好了,老师您好,我和他一样的试剂,但我做不出来阳性,请问可能的问题出在哪里呢,怎么都搞不出来,用的是买的工具细胞PBMC
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-6-5 07:26:22 | 显示全部楼层
lpp20230609 发表于 2024-6-4 16:41
人的IL17表达大概在1%,他这个结果蛮好了,老师您好,我和他一样的试剂,但我做不出来阳性,请问可能的问 ...

试一下正常人的全血看看吧。
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