细胞周期样本制备

Veblen

请问一下细胞周期样本制备时，为什么需要加入的乙醇需要预冷呢？

niwanmao

没有明确的原理上的说法。
但依我的理解是，一是保证乙醇浓度足够，这点相当重要，二是虽然是固定细胞作用，但为了保证细胞质量，平时我们习惯于4℃操作细胞样本，这对细胞有保护作用。

Veblen

niwanmao 发表于 2023-7-16 20:11
没有明确的原理上的说法。
但依我的理解是，一是保证乙醇浓度足够，这点相当重要，二是虽然是固定细胞作用 ...

好的，十分赞同。

Veblen

顺道问一下老师，DAPI也可以染DNA,进行细胞周期检测，
但为什么DAPI做细胞检测时需要对细胞进行固定后染色呢？DAPI是可以进行活细胞染色的，按理上来说就不要对细胞进行固定了吧。

wxd

因为有一些细胞对DAPI拒染。还有一些细胞不固定，直接染DAPI时，一部分DAPI会黏附在细胞膜表面，造成结果不准，与之类似的还有H33342。（这些现象是我们在工作中通过激光共聚焦显微镜观察DAPI以及H33342染色的细胞时发现的）。但是死细胞没有这些特性。因此，与其直接染色有可能会导致流式检测结果不准或者失败，固定后染色虽然多了一个步骤，但胜在稳妥。
另外对于固定细胞利用预冷的乙醇，我的理解是：乙醇固定细胞，主要是利用乙醇脱水的作用。但乙醇除了脱水作用，还可以脱脂，脱脂作用的强弱和乙醇浓度以及温度有关（最佳的脱脂浓度是60%-80%，温度是室温或者稍高于室温）。用室温的乙醇对细胞进行固定，会导致细胞膜以及细胞核膜被溶解，影响检测结果。因此用乙醇固定细胞时，需要预冷乙醇，并且要在4摄氏度或者更低温度下固定细胞。

shupian

niwanmao 发表于 2023-7-16 20:11
没有明确的原理上的说法。
但依我的理解是，一是保证乙醇浓度足够，这点相当重要，二是虽然是固定细胞作用 ...

老师，我想咨询一下，70%乙醇固定的细胞。4°保存能放多久阿，