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[其它] 巨噬细胞系M1 M2分型占比

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发表于 2023-11-11 14:35:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
请问各位老师,用RAW264.7诱导巨噬细胞分化M1,M2一般诱导出的M1和M2分别能占百分之多少呢?我标记了F480和CD206,CD80进行流式检测,用blank作为对照的话,M1和M2的阳性率可达到80%以上,是不是不太正常?

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发表于 2023-11-11 20:00:36 | 显示全部楼层
Blank做对照,不能反映巨噬细胞非特异结合Fc段的背景,故比例会很高。
而且如果你检测用的各个CD分子分群分不清的话,可能染色本身就有问题。
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 楼主| 发表于 2023-11-12 12:15:17 | 显示全部楼层
谢谢倪老师回复,但我的样本管有加Fc阻断剂,我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢?
而且我上次做的未刺激组和blank比阳性率也很高,能达到70%左右,M0期的CD206和CD80也会有这么高表达吗?
我做这几次CD206和CD80都没有明显分群,都是连续性表达的,这两个marker是应该有明显分群的?
我的染色步骤:6孔板细胞。CD206:2ul fc阻断剂 10min—清洗—F480(2.5ul)—清洗—固定剂 20min—清洗—fc 2ul —清洗—cd206(2.5ul)40min—清洗—重悬上机。
CD80:加fc 2ul 10min — F480 2.5ul+cd80 2ul 避光15min—清洗—重悬上机
麻烦老师您再看看染色大概可能是哪里出了问题呢?
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发表于 2023-11-12 20:08:22 | 显示全部楼层
嘎嘎 发表于 2023-11-12 12:15
谢谢倪老师回复,但我的样本管有加Fc阻断剂,我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢?
而且我上次做的未刺激 ...

1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38,可以分别两两组合去分,容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉,不要洗; 固定剂不要加。全部表面染色
3、必须要多色染色,单染肯定分不开群
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 楼主| 发表于 2023-11-13 08:53:17 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-11-12 20:08
1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38,可以分别两两组合去分,容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉 ...

好的 谢谢倪老师,我们改进试一试。
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