增加活率

苏沁沁

请问分选如何增加脆弱细胞的活率。谢谢。

wxd

这些都是经验：
1.两个及以上人员合作，在准备阶段，一个人处理细胞，另一个人做流式细胞仪的准备工作，最好能做到处理完毕细胞就可以立刻开始分选。在分选阶段，一个人进行分选，另一个人处理分选出来的细胞，缩短细胞在不适合生长的环境下等待的时间。
2.调整仪器参数时选择合适大小的喷嘴，喷嘴直径不小于细胞直径的3-4倍，以确保细胞整个都在样品流里边，不会因为鞘液流和样品流的流速差异受到剪切；
3.重悬细胞时用含2%血清的PBS重悬细胞，并将细胞插入冰水混合物中，保证分选前细胞状态；
4.接收管中装500微升血清并提前预冷，分选时将细胞打到血清中，并确保分选完成后血清比例不低于20%
5.分选遵循少量多次的原则，即将待分选的细胞分成几份，每次分选其中一份，其余的插入冰水混合物中，每份的分选时间不超过30分钟，总分选时长不超过4-5小时；
6.及时处理分选出来的细胞，最好分选一份就将分选出来的细胞收集起来进行培养，不要等到所有细胞都分选完之后再处理；
7.适当提高分选后细胞培养基的血清浓度，如果平时用10%血清，可以尝试提高到15-20%；