药物处理过的细胞，如何在FSC/SSC界面选取目标细胞群？

yzm

肿瘤细胞在经过药物处理三天后，在与对照组（未处理组细胞）相同电压下，其在FSC/SSC界面就看不到像对照组一样明显的目的细胞群了。想问问各位老师这种情况要如何处理？我后续也调低了FSC和SSC的电压，但几乎没什么区别，还是无法看到明显的目的细胞群。是否要缩短药物处理的时间？

niwanmao

Annexin/PI染色结果如何？如果死亡细胞过多，需要减少剂量或时间

wxd

从Specimen这个单词看，你用的大概率是BD公司的流式细胞仪，这个情况应该是有人把消光片从大换小了。依据就是不仅细胞群跑出了FSC的界限，细胞碎片区域也变大了，而且你还说了调整电压也没用。如果在加上荧光通道也有大规模压线的情况，就确定了。
BD公司的流式有三种规格的消光片，1.0的、1.5的、2.0的，分别降低光强度10%、15%和20%。使用时根据情况在流动室后边插入不同的消光片以达到最好的检测效果。如果你原来使用的是2.0的消光片，别人换了1.0的，你再检测，就比之前多了10%的光强度，肯定会出问题的。
找管理流式的老师或技术支持确认一下，先养一点细胞，不染色，用之前的参数上机通过FSC/SSC坐标确认一下之前用的是哪个滤光片吧。

范晋波

最好的办法就是和对照组圈同一位置，门保持一致进行分析  

yzm

niwanmao 发表于 2024-3-27 07:49
Annexin/PI染色结果如何？如果死亡细胞过多，需要减少剂量或时间

感谢倪老师回复，早凋加晚凋加一起百分之三十左右。我现在打算把加药时间缩到两天再试试看。

yzm

范晋波 发表于 2024-3-27 10:19
最好的办法就是和对照组圈同一位置，门保持一致进行分析

用同样的门会导致加药物所圈的细胞太少了，就很尴尬

yzm

niwanmao 发表于 2024-3-27 07:49
Annexin/PI染色结果如何？如果死亡细胞过多，需要减少剂量或时间

想再咨询一下老师，当细胞被药物处理之后会导致细胞的FSC和SSC发生变化么？根据我自己所查的结果来看，凋亡细胞的FSC会减少SSC会增加，但是我的加药物细胞似乎也没有向左上方移动。

yzm

wxd 发表于 2024-3-27 09:34
从Specimen这个单词看，你用的大概率是BD公司的流式细胞仪，这个情况应该是有人把消光片从大换小了。依据就 ...

果然是行家，确实是BD的。但是上述两张图是在同一时间测出的，应该不存在消光片发生变化的情况。碎片区域变大会不会是细胞被杀伤导致的？

niwanmao

yzm 发表于 2024-3-27 20:53
想再咨询一下老师，当细胞被药物处理之后会导致细胞的FSC和SSC发生变化么？根据我自己所查的结果来看，凋 ...

凋亡，是往左上去的

但是从图上看，可能更多的细胞是碎掉了，相当于已经是坏死阶段了，因此建议的是减少剂量或时间

wxd

这样的话，就需要考虑药物、药物溶剂在培养基中所占比例、药物对贴壁细胞耐受消化等方面的影响了。药物对细胞凋亡的影响因素主要有药物浓度、作用时间、作用机制等；药物溶剂如DMSO等有毒试剂在培养基中所占比例不宜超过1%，最好能设置一个同比例溶剂的对照组；如果是贴壁细胞，还应该考虑细胞的耐消化能力，有条件的话，可以试试改用Calcein-AM/PI试剂盒染色（这个只需要清洗，染色，不涉及消化，对细胞影响比较小），在荧光显微镜下观察染色结果。