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[标本处理] 小鼠皮下肿瘤组织做流式

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发表于 2024-5-27 16:33:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决

检测肿瘤内的免疫细胞,还不确实target cells是什么,所以目前myeloid cells, lymphocytes都看。分离完之后选取一定量的细胞数进行staining。

小鼠皮下肿瘤,肿瘤相对较大,但是每个样本的消化液只有5ml,因此就选取一部分肿瘤组织做流式。

在切肿瘤的过程中发现有些肿瘤血运很丰富,有些肿瘤像是脂肪组织比较多,每个肿瘤组织或多或少都不太一样。

----> 切的时候就拿不准要怎么切,不知道是否影响后续的结果? 谢谢~


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发表于 2024-6-3 10:43:25 | 显示全部楼层
其实不建议提前就选取切一部分,这样很容易有偏差,建议你自己用胶原酶之类的配置消化液,先进行初步消化,然后按细胞数量,等比例取部分出来继续染色
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 楼主| 发表于 2024-6-7 02:12:26 | 显示全部楼层
麦小光 发表于 2024-6-3 10:43
其实不建议提前就选取切一部分,这样很容易有偏差,建议你自己用胶原酶之类的配置消化液,先进行初步消化, ...

谢谢建议~
主要是因为肿瘤比较大,之前用过10ml消化液也还是不行,消化后过滤,经常很难滤下去。而且酶比较贵,一次要用很多,所以就只切了一部分。所有担心有时候因为切的位置不一样,影响后续结果。

题外问题:请问在staining之前镜下数细胞,是不是所有的活细胞都要数,不管形状/大小?(我记得所有活细胞都要数,所有再确认一下

感谢~
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发表于 2024-6-7 02:35:16 | 显示全部楼层
瓜瓜999 发表于 2024-6-7 02:12
谢谢建议~
主要是因为肿瘤比较大,之前用过10ml消化液也还是不行,消化后过滤,经常很难滤下去。而且酶比 ...

计量总数的时候确实是,得把除开碎片的所有细胞算进去,这样才能计算后续的某类细胞总数
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发表于 2024-6-7 02:37:45 | 显示全部楼层
还有一个是,瘤子如果太大,要注意伦理问题,通常如果体积超过1500立方毫米,会被判定为违反伦理准则,会直接撤稿的,show 瘤子照片的时候千万注意,不过流式流式做掉的瘤子倒是没什么,毕竟看不到了

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发表于 2024-6-7 02:40:54 | 显示全部楼层
实在消化不掉,可以先用剪刀剪碎为小块,从小块里面随机挑一部分出来继续消化,这样既不会过多损伤细胞,也不会造成后续难以消化,最后的结果也比较“均匀”,可以部分避免部分取样的时候造成的影响。
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 楼主| 发表于 2024-6-9 18:10:50 | 显示全部楼层
麦小光 发表于 2024-6-7 02:40
实在消化不掉,可以先用剪刀剪碎为小块,从小块里面随机挑一部分出来继续消化,这样既不会过多损伤细胞,也 ...

非常感谢~
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