溶血剂对荧光强度的影响

lianronghu0207 · 发表于 2011-10-9 09:41:21

1.在做淋巴亚群4/8/3时，分别用贝克曼的溶血素C与甲酸溶血后，上机跑样品发现在同等条件下用甲酸溶血CD8的荧光强度相比较溶血素C很低，对CD3，CD4无大的影响，试剂也是贝克曼的试剂；2.且甲酸溶血之后马上上机CD8无表达，要放置1-2分钟左右才会出现表达，这会不会跟溶血剂的PH值有关？不知老师是否有用过这类的溶血剂，遇到过这样的问题。

niwanmao · 发表于 2011-10-9 11:07:35

lianronghu0207 发表于 2011-10-9 09:41

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1.在做淋巴亚群4/8/3时，分别用贝克曼的溶血素C与甲酸溶血后，上机跑样品发现在同等条件下用甲酸溶血CD8的 ...

为什么用甲酸溶血呢？

chujindong · 发表于 2011-10-9 11:37:48

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应该是与pH值有关。抗原抗体是靠非共价键结合的，容易受到电解质变化的影响。

lianronghu0207 · 发表于 2011-10-9 12:19:57

因为BC有自动溶血仪配的就是甲酸的溶血剂，而且甲酸可以自己配的。不过有些时候发现甲酸溶血太厉害了，过头了颜色都变黑了。后来我用了BD的4/8/3做了对比确没有出现CD8荧光强度降低的问题，觉得挺奇怪的。

haven_t · 发表于 2011-10-9 15:29:46

本帖最后由 haven_t 于 2011-10-9 15:30 编辑

是不是那个叫Lyse/Wash Assistant 的东西，如果是的话我也用过，我们直接买BD的溶血素，成分是什么就不知道了，那个机器其实就是定时加样去上清而已，我觉得用其他溶血素也一样，关键是时间设置要正确

niwanmao · 发表于 2011-10-9 16:16:37

lianronghu0207 发表于 2011-10-9 12:19

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因为BC有自动溶血仪配的就是甲酸的溶血剂，而且甲酸可以自己配的。不过有些时候发现甲酸溶血太厉害了，过头 ...

这个溶血仪不能用其它溶血素吗？就象haven_t所说那样，是不是可以自己配制溶血素或者购买BD的溶血素代替甲酸呢？

lianronghu0207 · 发表于 2011-10-20 21:38:24

不能用其他的溶血素，他们是配套的，不过甲酸可以自己配。BD的溶血素用在贝克曼上的机器上对FSC有影响，用的不是很好，可能是贝克曼的仪器前向角的角度不一样，淋巴检测出来百分比总是不对。

niwanmao · 发表于 2011-10-20 22:21:36

lianronghu0207 发表于 2011-10-20 21:38

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不能用其他的溶血素，他们是配套的，不过甲酸可以自己配。BD的溶血素用在贝克曼上的机器上对FSC有影响，用 ...

机器老不老？CD8的荧光标记是什么？

mesunrui · 发表于 2011-10-21 15:05:18

甲酸确实太难控制了时间掌握不好粒细胞会死掉碎片很多对各系比例很大影响 ABC液
甲酸为主，溶血作用强，配合Q-Prep自动血样本制备仪，35s完成溶血
红细胞裂解最快最完全，碎片少，适合大多数检测
酸溶血可能会对CD34+细胞等含量较低的细胞产生影响
如自行配制裂解液，可能会由于所用试剂本身质量原因导致离子强度及酸碱度有差异，导致荧光强弱受影响

Optilyse C
复合配方，溶血作用中等强度，手工溶血
红细胞裂解较完全，碎片稍多，对细胞荧光染色影响最小，染色最明亮，适合大多数检测
有甲酸成分，可能会对CD34+细胞等含量较低的细胞产生影响
含固定剂成分，不用于细胞活力相关检测

IOtest 3
氯化铵为主的裂解液，溶血作用弱，手工溶血
红细胞裂解作用较弱，对细胞表面抗原影响最小，可用于CD34+细胞等含量较低的细胞检测及不确定表达的抗原检测
如选择不含固定剂，可用于细胞活力检测

Versalyse
复合配方，溶血作用弱，手工溶血
红细胞裂解作用较弱，对细胞形态影响最小
如选择不含固定剂，对细胞活力影响最小
可用于CD34+细胞等含量较低的细胞检测及细胞活力检测
这是用于贝克曼机器溶血素的简介

lianronghu0207 · 发表于 2011-10-24 21:54:15

CD8是PE的标记，仪器的状态挺好的，是贝克曼的XL，09年的时候采购的。非常感谢mesunrui的资料，很全面，但是我咨询了其他的一些用户，他们用的就没有出现这样的情况，仪器和溶血剂的配方是一样的，一开始考虑会不会是蒸馏水的问题，但是后来用了娃哈哈纯净水配也还是一样的结果，所以觉得挺难解释的。

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