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[淋巴细胞相关] PBMC Th17的IL17不表达怎么办

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发表于 2024-6-4 16:46:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏50流星未解决
买的工具细胞PBMC,复苏后状态挺好的(活率90%以上),悬浮培养2天后,刺激用BD的BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™,刺激4-5h,破膜是BD  Fixation/Permeabilization Kit, 染色IL17A-APC,从CD3+CD8-或者CD3+CD4选IL17,可是做了几次都没结果,阳性几乎为0.


求大神指导啊,头炸了要

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发表于 2024-6-5 07:32:53 | 显示全部楼层
3+4+的比例如何?

一般功能指标,还是最好是新鲜全血或者刚提出来的PBMC更好一些,冻存复苏后的样本有文献这么做,但难度会偏大一点
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 楼主| 发表于 2024-6-5 09:04:56 来自手机 | 显示全部楼层
Cd3CD4还可以,能达到70%左右,我也想过冻存pbmc会影响效果,但我们做检测放行的,用全血不是很现实,提取pbmc公司又成本不接受。老师能把您提到的文献分享一下嘛?拜读一下
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发表于 2024-6-5 09:52:41 | 显示全部楼层
lpp20230609 发表于 2024-6-5 09:04
Cd3CD4还可以,能达到70%左右,我也想过冻存pbmc会影响效果,但我们做检测放行的,用全血不是很现实,提取p ...

如果自己方便采血的话,提PBMC的成本应该不高吧,商品分离液每Test大概5块,离心管5毛(普通离心管即可)。
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发表于 2024-6-5 11:04:29 | 显示全部楼层
lpp20230609 发表于 2024-6-5 09:04
Cd3CD4还可以,能达到70%左右,我也想过冻存pbmc会影响效果,但我们做检测放行的,用全血不是很现实,提取p ...

我们站内OMIP收录的Protocol里面,不少是针对PBMC的:https://www.flowcyto.cn/bbs/foru ... tid=6&fromop=my
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发表于 2024-6-6 16:29:16 | 显示全部楼层
用WB做一下看看是否表达了IL-17A(增大上样量哈,50ug),不表达的话就是刺激或者转运抑制没成(增加刺激时间或者浓度)。如果表达了,换个克隆号的抗体或者破膜固定液再试试。
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