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[功能检测] ICD中的钙网蛋白 (CALR) 的检测

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发表于 2024-6-28 09:41:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death,ICD)的钙网蛋白 (CALR) 的检测,大家有人做过吗?有什么需要注意的事项

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发表于 2024-6-28 13:58:40 | 显示全部楼层
1. CALR 暴露是 ICD 的标志:钙网蛋白从内质网转位到细胞表面被认为是 ICD 的主要指标之一,是抗原递呈细胞的 "吃我 "信号,启动了针对垂死肿瘤细胞的免疫反应。

2. 检测方法:
   - 流式细胞术: 已开发出一种双色流式细胞术方案,用于量化固定样本中与 ICD 相关的 CALR 表面暴露。详见https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32000891/
   - 荧光显微镜: 可使用特异性抗体或专用构建体(如与荧光标签融合的 CALR)检测细胞表面的 CALR。
   - Western Blot: 细胞表面蛋白生物素化后,链霉亲和素介导的沉淀可用于检测细胞表面的 CALR。

3. 时机至关重要: CALR 暴露发生在 ICD 的早期阶段,即细胞凋亡前阶段。在细胞晚期凋亡或坏死之前评估 CALR 暴露非常重要。
4. 使用适当的对照组: 将未经处理的细胞和使用非 ICD 诱导剂处理的细胞作为对照。
5. 与其他 ICD 标记相结合: 虽然 CALR 暴露很重要,但建议评估其他 ICD 标志,如 ATP 分泌和 HMGB1 释放,以进行综合评估。
6. 考虑细胞类型和治疗方法: 不同的癌细胞系和 ICD 诱导剂可能会显示不同程度的 CALR 暴露。
7. 体内验证:虽然体外检测具有参考价值,但确认 ICD 的黄金标准是证明垂死细胞在体内启动适应性免疫的能力。
8. 工程检测工具: 一些研究人员开发了与生物发光蛋白融合的 CALR 靶向单体,用于检测培养肿瘤细胞和小鼠模型中的 ICD。

在 ICD 研究中进行 CALR 检测时,关键是要使用适当的方法、考虑暴露的时间、包括适当的对照,并结合其他 ICD 标记和体内免疫反应来解释结果。


Citations:
[1] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7827772/
[2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32000891/
[3] https://jitc.bmj.com/content/8/1/e000337
[4] https://www.mdpi.com/2072-6694/13/11/2801
[5] https://www.sciencedirect.com/sc ... i/S0076687919301703
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 楼主| 发表于 2024-7-1 09:47:04 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-6-28 13:58
1. CALR 暴露是 ICD 的标志:钙网蛋白从内质网转位到细胞表面被认为是 ICD 的主要指标之一,是抗原递呈细胞 ...

好的,谢谢倪老师
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发表于 2024-7-2 20:39:47 | 显示全部楼层
用流式上机检测效果还是比较好的,我们是间接处理,所以用的6孔板(也是为了上机时细胞数量充足),用的Novus的抗体,效果还是不错的。个人推荐ICD常见的三个指标(CRT、HMGB1、ATP)前后脚做,这样一定程度上能明确一下用的药物或者技术能不能激活细胞的ICD。
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发表于 2024-7-2 20:40:44 | 显示全部楼层
wm170226 发表于 2024-7-2 20:39
用流式上机检测效果还是比较好的,我们是间接处理,所以用的6孔板(也是为了上机时细胞数量充足),用的Nov ...

如果您是做肿瘤的,我也做过IF,效果也非常明显,比较推荐。
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