ICD中的钙网蛋白 (CALR) 的检测

飞翔

免疫原性细胞死亡（immunogenic cell death，ICD）的钙网蛋白 (CALR) 的检测，大家有人做过吗？有什么需要注意的事项

niwanmao

1. CALR 暴露是 ICD 的标志：钙网蛋白从内质网转位到细胞表面被认为是 ICD 的主要指标之一，是抗原递呈细胞的 "吃我 "信号，启动了针对垂死肿瘤细胞的免疫反应。

2. 检测方法：
   - 流式细胞术： 已开发出一种双色流式细胞术方案，用于量化固定样本中与 ICD 相关的 CALR 表面暴露。详见https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32000891/
   - 荧光显微镜： 可使用特异性抗体或专用构建体（如与荧光标签融合的 CALR）检测细胞表面的 CALR。
   - Western Blot： 细胞表面蛋白生物素化后，链霉亲和素介导的沉淀可用于检测细胞表面的 CALR。

3. 时机至关重要： CALR 暴露发生在 ICD 的早期阶段，即细胞凋亡前阶段。在细胞晚期凋亡或坏死之前评估 CALR 暴露非常重要。
4. 使用适当的对照组： 将未经处理的细胞和使用非 ICD 诱导剂处理的细胞作为对照。
5. 与其他 ICD 标记相结合： 虽然 CALR 暴露很重要，但建议评估其他 ICD 标志，如 ATP 分泌和 HMGB1 释放，以进行综合评估。
6. 考虑细胞类型和治疗方法： 不同的癌细胞系和 ICD 诱导剂可能会显示不同程度的 CALR 暴露。
7. 体内验证：虽然体外检测具有参考价值，但确认 ICD 的黄金标准是证明垂死细胞在体内启动适应性免疫的能力。
8. 工程检测工具： 一些研究人员开发了与生物发光蛋白融合的 CALR 靶向单体，用于检测培养肿瘤细胞和小鼠模型中的 ICD。

在 ICD 研究中进行 CALR 检测时，关键是要使用适当的方法、考虑暴露的时间、包括适当的对照，并结合其他 ICD 标记和体内免疫反应来解释结果。


Citations:
[1] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7827772/
[2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32000891/
[3] https://jitc.bmj.com/content/8/1/e000337
[4] https://www.mdpi.com/2072-6694/13/11/2801
[5] https://www.sciencedirect.com/sc ... i/S0076687919301703

飞翔

niwanmao 发表于 2024-6-28 13:58
1. CALR 暴露是 ICD 的标志：钙网蛋白从内质网转位到细胞表面被认为是 ICD 的主要指标之一，是抗原递呈细胞 ...

好的，谢谢倪老师

wm170226

用流式上机检测效果还是比较好的，我们是间接处理，所以用的6孔板（也是为了上机时细胞数量充足），用的Novus的抗体，效果还是不错的。个人推荐ICD常见的三个指标（CRT、HMGB1、ATP）前后脚做，这样一定程度上能明确一下用的药物或者技术能不能激活细胞的ICD。

wm170226

wm170226 发表于 2024-7-2 20:39
用流式上机检测效果还是比较好的，我们是间接处理，所以用的6孔板（也是为了上机时细胞数量充足），用的Nov ...

如果您是做肿瘤的，我也做过IF，效果也非常明显，比较推荐。