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[其它] 细胞死活染料和抗体染色的先后顺序

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发表于 2024-7-3 21:34:45 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
想请教一下大家胺基类的死活染料(LIVE/DEAD)是在染抗体之前最先加入,还是像DAPI一样最后加?

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发表于 2024-7-4 08:39:25 | 显示全部楼层
胺基类染料可能会跟抗体等蛋白发生非特异性结合,所以需要在染抗体前加入,并且染色体系内不能有蛋白存在。
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发表于 2024-7-4 10:42:40 | 显示全部楼层
我们一般是把FVS和Fc阻断剂放在一起,在最开始的时候染色。后面再做表染和核染/胞内染色。
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发表于 2024-7-4 15:39:41 | 显示全部楼层
我的习惯是先染FVS,纯PBS体系内,非常重要!体系内不能有有游离胺基,然后用biolegend的cell staining buffer终止,离心后fc封闭,后面都是cell staining buffer体系,然后染抗体。先染抗体我试过,死活效果非常不好,要洗的比较干净,其中多了很多步骤。另外,如果你需要固定,当然是要先染FVS咯。

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