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[淋巴细胞相关] 关于小鼠脑和脊髓流式细胞术分析

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发表于 2024-7-4 12:13:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏5流星未解决
各位老师好,我目前的课题涉及到小鼠脑和脊髓的免疫细胞分型,有几个简单的问题不是很清楚,希望得到各位老师的指点:

1、通过酶解和percoll分离,一只小鼠的大脑能获得大概0.6-0.8million的免疫细胞,请问一下这个细胞比例算是正常的吗?
2、我想看一下脑中细胞因子的分泌水平,可以用流式的方法检测吗(PMA+Ionomycin)?我查阅文献发现有人是用ELISA进行检测的

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发表于 2024-7-4 16:39:51 | 显示全部楼层
1、根据现有数据,使用酶解和 percoll 分离法从小鼠大脑中分离出的免疫细胞产量约为 0.6-0.8 Million个细胞,是合理的。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3339837/  这项研究表明,通常能从每只小鼠大脑中获得约 3~5×10E5 个细胞。

2、虽然酶联免疫吸附试验(ELISA)也是检测细胞因子的常用方法,并因其灵敏度和定量能力而被广泛使用,但检测的细胞上清已分泌的细胞因子。流式除了可通过CBA技术同样检测细胞上清的细胞因子,也可通过PMA+离子霉素刺激细胞,分析某个亚群的胞内因子分泌情况。从你的实验设计看,应该是要检测胞内因子吧,这样的话ELISA其实是不适用的。
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 楼主| 发表于 2024-7-4 18:31:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-7-4 16:39
1、根据现有数据,使用酶解和 percoll 分离法从小鼠大脑中分离出的免疫细胞产量约为 0.6-0.8 Million个细胞 ...

所以不能一次性把实验结果都拿到吧因为细胞量不够,做一次胞内检测至少也需要1M个细胞吧
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发表于 2024-7-4 20:52:27 | 显示全部楼层
科研废物 发表于 2024-7-4 18:31
所以不能一次性把实验结果都拿到吧因为细胞量不够,做一次胞内检测至少也需要1M个细胞吧 ...

主要看你要分析的群体少不少,如果绝大部分是你的目的细胞,那么几万个也能做做看。
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发表于 2024-7-5 17:12:23 | 显示全部楼层
做流式其实够了,但是做ELISA很可能不够,因为ELISA的检测限问题,需要足够量的细胞,通常是10e5一个样本,并且通常你需要测副孔和多个细胞因子,基本上是不够的,像这种情况,要么直接上多因子检测,小样本量就可以测很多指标,要么全套流式,多色方案,一套实验可以 测完所有细胞因子

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 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
麦小光 发表于 2024-7-5 17:12
做流式其实够了,但是做ELISA很可能不够,因为ELISA的检测限问题,需要足够量的细胞,通常是10e5一个样本, ...

明白了,谢谢!
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