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[标本处理] FMO的补偿及应用问题

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发表于 5 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星未解决
我目前在做人PBMC中免疫细胞胞内因子检测,针对低表达的因子做了FMO。请问FMO组的补偿是直接应用全部抗体的补偿库然后手动微调还是再单独用FMO组对应抗体再做补偿去应用啊?话有一个问题。针对同一供体不同天数采集的样本检测,每次都需要进行FMO吗

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发表于 4 天前 | 显示全部楼层
FMO就是为了全部抗体而存在,看补偿对染色通道的影响,不要动FMO组补偿。FMO是相当于全染组而做的,跟你培养那天没关系,你要想用FMO画门对照,一组样本做对应通道FMO
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 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2024-7-11 08:05
FMO就是为了全部抗体而存在,看补偿对染色通道的影响,不要动FMO组补偿。FMO是相当于全染组而做的,跟你培 ...

第二个问题我可能没有说清楚。我们的样本是直接从人血提取后做检测,采样是每隔一个月进行的,考虑到每次采样的质量问题,每次检测相同抗原表达的时候应该FMO还是要一起做的吧,第一次做的FMO不一定能很好的应用后面时间点的检测
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发表于 4 天前 | 显示全部楼层
wxc 发表于 2024-7-11 09:47
第二个问题我可能没有说清楚。我们的样本是直接从人血提取后做检测,采样是每隔一个月进行的,考虑到每次 ...

稳定性好的,可能基本上通用。但稳妥起见,每批次做的时候都做一个吧
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 楼主| 发表于 3 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-7-11 10:20
稳定性好的,可能基本上通用。但稳妥起见,每批次做的时候都做一个吧

谢谢老师。我还有几个问题想请教一下。现在我有A 、B 、C 、D、 E(T细胞胞内因子,连续性且表达强度低,同时占父群比例很低)多色染色,需要检测检测E的抗体灵敏度和较为准确的划去阳性群。
组1:空白
组2:FMO(E)
组3:FMO(E)+E的iso
组4:全染
微信图片_20240712090241.png

所有组均未封闭。从图来看,与组2相比,组3是不是更合适作为阳性群划分的对照?我要是分析这个抗体的灵敏度是不是也要用组3的数据啊?如果我一开始就用封闭,理论上用组2去画群和去分离灵敏度也可以呀?
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发表于 3 天前 | 显示全部楼层
wxc 发表于 2024-7-12 09:09
谢谢老师。我还有几个问题想请教一下。现在我有A 、B 、C 、D、 E(T细胞胞内因子,连续性且表达强度低, ...

组3背景略偏强,做一下阻断可能会有点作用,阻断后可能组2和组3都可以
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 楼主| 发表于 3 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-7-12 10:48
组3背景略偏强,做一下阻断可能会有点作用,阻断后可能组2和组3都可以

感谢老师
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