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[淋巴细胞相关] 免疫缺陷鼠外周流式

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发表于 2024-8-8 23:05:42 来自手机 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
各位老师好,本人是新手小白。
图1是c57外周血流式图,图2是相同程序跑的免疫缺陷鼠外周血流式图,请问出现cd3和cd19双阳性细胞的原因可能是什么?这群细胞的形状也很奇怪。补偿已调成横平竖直。
流式上机前操作:
取100-150ul眼眶血,加入1ml ACK(thermo)裂红,冰上/常温裂红10min,800g离心5min,PBS洗一次,二次裂红5min,离心,PBS洗一次;抗体冰上避光敷育30min,用含2% FBS的PBS洗两次,500ul含2%  FBS的PBS重悬细胞上机。
mCD45-APC,mCD3-FITC,mCD19-PE,mNK1.1-PC7

IMG_20240808_184239.jpg
IMG_20240808_184205.jpg
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 楼主| 发表于 2024-8-9 07:37:31 来自手机 | 显示全部楼层
使用的是贝克曼的仪器
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发表于 2024-8-9 07:44:33 | 显示全部楼层
手机拍照的时候,可调低分辨率,可以避免屏幕条纹的出现,看这两张图晃眼

至于第2个图的原因,不太好说,请逐步排查:
1、第2个样本是否和第1个样本同一天跑的?
2、第2个样本跑的当天,仪器是否做过质控?
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 楼主| 发表于 2024-8-9 09:09:17 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-8-9 07:44
手机拍照的时候,可调低分辨率,可以避免屏幕条纹的出现,看这两张图晃眼

至于第2个图的原因,不太好说, ...

老师您好,我重新上传了flowJo的图片,图1是C57,图2是免疫缺陷鼠,图1和图2是同一次跑的结果;图3是与图2相同的一只免疫缺陷鼠上一次跑的结果。
1、流式程序是一样的。图2和图1是本周周四同一天跑的,图3是本周周二跑的。
2、贝克曼仪器7月中旬工程师来做过质控后就没有再质控了。

图1

图1

图2

图2

图3

图3
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发表于 2024-8-9 11:16:49 | 显示全部楼层
是用抗凝管采的外周血吗?肝素还是EDTA。另外相同程序,补偿都调过了吗?我们实验室的流式每次补偿都会有点差异。
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 楼主| 发表于 2024-8-9 12:01:40 | 显示全部楼层
三更灯火 发表于 2024-8-9 11:16
是用抗凝管采的外周血吗?肝素还是EDTA。另外相同程序,补偿都调过了吗?我们实验室的流式每次补偿都会有点 ...

用的EDTA抗凝管,补偿调过了
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发表于 2024-8-9 14:49:51 | 显示全部楼层
有个脑洞的想法,会不会是基因缺陷鼠的细胞和正常鼠的细胞区别比较大,用正常鼠调的补偿,不太适合基因缺陷鼠的呢。图2太像我没调好补偿的样子啦
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发表于 2024-8-9 15:18:58 | 显示全部楼层
abbie 发表于 2024-8-9 09:09
老师您好,我重新上传了flowJo的图片,图1是C57,图2是免疫缺陷鼠,图1和图2是同一次跑的结果;图3是与图 ...

图2的CD3CD19双阳的群SSC很大,不是淋巴细胞。
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发表于 2024-8-9 15:21:08 | 显示全部楼层
死细胞的自发荧光?
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发表于 2024-8-9 15:21:46 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2024-8-9 15:18
图2的CD3CD19双阳的群SSC很大,不是淋巴细胞。

另外样本活率好吗?建议在活细胞里圈门。
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