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[其它] 肺巨噬细胞圈门

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发表于 2024-9-18 10:55:40 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏3流星未解决
各位站内的老师想请教一个问题:做新生鼠肺巨噬细胞完成样本制备后上机,去黏连和圈出死活以后,用CD64和F4/80圈出肺巨噬细胞。最近发现这群细胞里又分了群,但不知道这群细胞是社么。两次实验不同的地方就是换了个离心机。望群里老师指导。

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发表于 2024-9-18 15:30:16 | 显示全部楼层
两份样本应该不是同时处理的吧,感觉第二份样本处理后状态稍微差一些的样子,有试过选这个群看一下在FSC/SSC和在Live/Dead的位置吗?
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 楼主| 发表于 2024-9-18 15:58:06 | 显示全部楼层
本帖最后由 cz1206 于 2024-9-18 16:00 编辑
h1030506 发表于 2024-9-18 15:30
两份样本应该不是同时处理的吧,感觉第二份样本处理后状态稍微差一些的样子,有试过选这个群看一下在FSC/SS ...

这两份样本不是同时处理的,第二份把这群圈出来,感觉细胞活性还行。
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发表于 2024-9-18 16:09:20 | 显示全部楼层
cz1206 发表于 2024-9-18 15:58
这两份样本不是同时处理的,第二份把这群圈出来,感觉细胞活性还行。

我个人觉得,中间密度高的,可能还是此次非特异性本底,你可以尝试做Fc阻断后再染,是不是会消失
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 楼主| 发表于 2024-9-18 21:14:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-9-18 16:09
我个人觉得,中间密度高的,可能还是此次非特异性本底,你可以尝试做Fc阻断后再染,是不是会消失 ...

倪老师您好,所有样本都是经过Fc阻断以后进行后续染色的。
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发表于 2024-9-19 08:17:50 来自手机 | 显示全部楼层
cz1206 发表于 2024-9-18 21:14
倪老师您好,所有样本都是经过Fc阻断以后进行后续染色的。

单纯从FSC/SSC看,这管碎片多了很多,如果fc已经阻断,那么只能考虑样本本身状态或者处理时导致细胞活性受影响导致了,无论是碎片还是细胞的大小和颗粒度都变化蛮大

点评

好的,谢谢倪老师,感谢您的帮助。  发表于 2024-9-19 11:07
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发表于 2024-9-19 11:24:31 | 显示全部楼层
你看下2次样本中红色门内细胞群的位置是否接近呢?如果接近的话应该是样本处理过程中的差异导致的。
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发表于 2024-9-24 17:08:59 | 显示全部楼层
状态不一的自发荧光差异和背景干扰引起的差异,强阳的那部分应该是你要的,如果样本都能分开,也不影响结果。
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