说说重悬、混匀细胞的方法

chujindong

流式操作中经常需要离心、洗涤细胞，离心之后一般都需要重悬细胞。因为细胞一般是比较少的，有时肉眼观察不到。以前我用枪头混匀，但感觉枪头会吸附细胞，而且用枪头洗既费时间又费枪头；后来就用漩涡振荡器震荡，虽然省了不少时间，但还是没把握，若是管子里液体有2ml液体左右应该问题不大，但若只有200ul左右就不好说了（抗体孵育时），振荡过后必然会有细胞贴到壁上，细胞自己也不会滑下来。这样的话实际参与孵育的细胞量就减少了。不知道大家平时怎么做的？

niwanmao

chujindong 发表于 2011-10-18 11:26

                               
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流式操作中经常需要离心、洗涤细胞，离心之后一般都需要重悬细胞。因为细胞一般是比较少的，有时肉眼观察不 ...

混匀标本最好就是用手指弹（左手大拇指和食指捏住管子中上部，右手食指去弹管底），这个弹的力度要掌握的比较好，既使它振的匀，又不会弹出。
我最开始就是用手指弹，但随着标本量的增加，时间耗不起，就只能用振荡器，振荡其实力度掌握好效果也还可以，如果发现管壁上有细胞或抗体粘在上面，就放在离心机里，瞬时离心一下就可以了。

chujindong

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是的，我上机的时候使用手指弹匀，但操作的时候不能肯定是否弹匀了，因为细胞太少的话确实看不到弹得效果如何。瞬时离心我倒没试过，总想着一离心就白干了，倒没想到这招，可以试试看。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-10-18 16:30

                               
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是的，我上机的时候使用手指弹匀，但操作的时候不能肯定是否弹匀了，因为细胞太少的 ...

因为你之前已经混过了，所以后面的离心只是把管壁上的细胞和抗体离心下来 ，然后再轻轻用手弹几下，不要太用力。

stef1981

样品比较少，目前还是用手弹，以后样品多了还是要靠振荡器和离心机了

haven_t

放在试管架上用手晃，一次就完成一百多管。试管架的孔最好比较松动，晃的时候试管与试管架的撞击会使混匀效果更好。

niwanmao

haven_t 发表于 2011-10-19 08:14

                               
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放在试管架上用手晃，一次就完成一百多管。试管架的孔最好比较松动，晃的时候试管与试管架的撞击会使混匀效 ...

这个有点技术难度的。看看还有没有别的奇招！

chujindong

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{:2_31:}这个难度确实不小啊!我觉得把离心后的细胞吹起来还是比较难的，有时候震荡不起来还是得用枪吹。全血好像更难混匀。另外，管子里的液体量超过2.5ml左右时，用振荡器的效果就不是特别好了。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-10-20 11:42

                               
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这个难度确实不小啊!我觉得把离心后的细胞吹起来还是比较难的，有时候震荡不 ...

液体量较多的时候，用振荡器就有点危险，这时手法很重要，拿捏得到位。

haven_t

chujindong 发表于 2011-10-20 11:42

                               
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这个难度确实不小啊!我觉得把离心后的细胞吹起来还是比较难的，有时候震荡不 ...

离心去上清后立即震荡效果较好，加液体后混匀效果较差