不同患者用不同荧光素的抗体检测，比例完全不一致，原因？

Veblen

有这样一个神奇的例子，同样的患者，用不同的CD4抗体染色，做出来比例差异很大，甚至是有与无的区别；

都是比较亮的荧光素，补偿也没有问题，可能是什么原因呢？
背景：同一支CD4（percp5.5，克隆位点：OKY4）染料  染A样本和B样本，结果：A样本可以检测出CD4阳性，B样本不能检测出CD4阳性  ；
换一支CD4(BV421,克隆位点：RPA-T4)染料，A样本和B样本都能染出CD4阳性；
样本A 和E 是不同的患者细胞； BCD是同一个患者的细胞； Day是PBMC中提取培养的T细胞进行培养的天数；
问题：CD4  CD8+的比例在BCD样本中用不同克隆位点的抗体检测比例千差万别，why？
请看图：
谢谢大家。

niwanmao

B、C、D看起来更像没加抗体的样子

还是建议多重复几次吧

麦小光

niwanmao 发表于 2025-4-1 07:39
B、C、D看起来更像没加抗体的样子

还是建议多重复几次吧

确实，同意倪老师的观点，我也感觉像哪一个步骤出了问题，一般来说就算有差异，哪怕就是抗体荧光素有质量问题，也不会像BCD这种，完全没有阳性，何况还是CD4这种超经典的指标

Veblen

已经重复过了，几十例样本，就这一个样本出现这种情况。不知道什么原因，样本一起处理，同一个人处理，所有步骤都一样。

niwanmao

Veblen 发表于 2025-4-5 21:47
已经重复过了，几十例样本，就这一个样本出现这种情况。不知道什么原因，样本一起处理，同一个人处理，所有 ...

我们的意思是，对这个样本，再进行单独重新染色，确认漏加抗体的可能性

正如你所说，几十个就这一个出现问题更加说明是处理上的问题，而非试剂问题了

Veblen

niwanmao 发表于 2025-4-6 15:21
我们的意思是，对这个样本，再进行单独重新染色，确认漏加抗体的可能性

正如你所说，几十个就这一个出现 ...

已经单独重复检测了，不知道为啥，还是一模一样的结果，太伤脑了
谢谢老师

niwanmao

Veblen 发表于 2025-4-6 17:47
已经单独重复检测了，不知道为啥，还是一模一样的结果，太伤脑了
谢谢老师 ...

如果重复过，说明真阴，那么就跟克隆号结合位点相关了

不知道B患者有无什么特殊的用药史？或者该患者有无特殊之处？

Veblen

niwanmao 发表于 2025-4-7 08:23
如果重复过，说明真阴，那么就跟克隆号结合位点相关了

不知道B患者有无什么特殊的用药史？或者该患者有 ...

嗯嗯，谢谢，现在我们的考虑与您提出的一致，想去问问科室该患者的病史。
感谢老师的建议。