CD25的FMO假阳

毛豆24821 · 发表于 2025-4-3 11:35:38

做人源化小鼠的肿瘤检测，FMO中CD25-APC有一群阳性群，排除补偿和操作失误的原因，不知道为啥有这群，没有用488的荧光，也看不太出来是不是自发荧光。请教有没有方法解决

niwanmao · 发表于 2025-4-3 15:19:53

是CD25的FMO对照管吗？

其它通道分别是什么？是否有串联染料？

毛豆24821 · 发表于 2025-4-3 16:30:23

niwanmao 发表于 2025-4-3 15:19
是CD25的FMO对照管吗？

其它通道分别是什么？是否有串联染料？

hurunhuan · 发表于 2025-4-3 16:48:09

把阳性群单独圈出来，看看在FSC/SSC图上的位置，是在主细胞群还是只是碎片。串联染料都有降解的可能性，APC-CY7有降解的概率，可以试试APC和APC-CY7都不染试试，如果消失，大概率是APC-CY7染料降解了。就只能优化操作或者是方案了。

niwanmao · 发表于 2025-4-4 15:42:18

毛豆24821 发表于 2025-4-3 16:30

如@hurunhuan 站友所说，目前暂时首先排查一下APC-cy7的染料降解可能性吧

毛豆24821 · 发表于 2025-4-7 09:01:27

hurunhuan 发表于 2025-4-3 16:48
把阳性群单独圈出来，看看在FSC/SSC图上的位置，是在主细胞群还是只是碎片。串联染料都有降解的可能性，APC ...

不是碎片，不是死细胞，不是黏黏。我也是怀疑是CD45-APC-CY7的问题。谢谢，我来试试

毛豆24821 · 发表于 2025-4-10 14:26:35

本帖最后由毛豆24821 于 2025-4-10 16:11 编辑

毛豆24821 发表于 2025-4-7 09:01
不是碎片，不是死细胞，不是黏黏。我也是怀疑是CD45-APC-CY7的问题。谢谢，我来试试 ...

不是降解问题。。。

毛豆24821 · 发表于 2025-4-10 18:59:45

我们又试了所有marker的单染，单染补偿调节好应用到full panel，FMO-CD25CD45是好的，FMO-CD25还是不对。
APC-CY7 CD45对APC CD25的补偿没法扣除吗？但是CD45的单染补偿是可以调平的啊。是什么原因呢？
准备试试换BUV395 CD45试试。

niwanmao · 发表于 2025-4-10 19:39:25

毛豆24821 发表于 2025-4-10 18:59
我们又试了所有marker的单染，单染补偿调节好应用到full panel，FMO-CD25CD45是好的，FMO-CD25还是不对。
A ...

有图吗？或者FCS文件

毛豆24821 · 发表于 2025-4-14 11:17:14

niwanmao 发表于 2025-4-10 19:39
有图吗？或者FCS文件

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[淋巴细胞相关] CD25的FMO假阳