钙流检测

JHE

各位大佬，我是做筛选化合物抑制细胞TRPV1激活钙离子内流的，用的Fluo-4探针。我想请问一下一般待筛选化合物应该在探针孵育前加入还是在探针孵育后加入，一般孵育多久？

niwanmao

一般先加Fluo4 AM探针，20-37℃作用15-60分钟，使其充分进入胞内；
接着洗涤去除游离的Fluo4 AM；
接着在室温或37°C下进一步孵育30分钟以进行Fluo4 AM去酯化，确保去酯化后的活性染料捕获在细胞内；
详细操作步骤可参考ThermoFisher 的技术手册：https://assets.thermofisher.com/ ... manuals/mp01240.pdf


后续的激活和抑制，可参考类似染料的Protocol：Luo J, Zhu Y, Zhu MX, Hu H. Cell-based calcium assay for medium to high throughput screening of TRP channel functions using FlexStation 3. J Vis Exp. 2011;(54):3149. Published 2011 Aug 17. doi:10.3791/3149

JHE

niwanmao 发表于 2025-4-13 19:41
一般先加Fluo4 AM探针，20-37℃作用15-60分钟，使其充分进入胞内；
接着洗涤去除游离的Fluo4 AM；
接着在室 ...

感谢