求助肝脏流式为什么F4/80+Cd11b+巨噬细胞基本没见到有

沃兹姬

肝脏细胞悬液制备后，是按照一个师姐提供的percoll梯度离心22%66%取中间层白膜。最后跑出来如图，看到F4/80+Cd11b+巨噬细胞基本没有多少，可能是什么问题。是制样的时候丢了还是染色问题







还有就是像空白管的图，空白的时候7aad通道开始往右偏，是电压的问题吗

niwanmao

F4/80有阳性，但是11b的图没看到，没有做成F4/80和CD11b的双参数图吗？

另外，Kupffer细胞的密度大约在1.06-1.08 g/mL范围内。需要确认22%/66%这个梯度是否能有效地将巨噬细胞富集在中间层（即密度介于22%和66% Percoll溶液密度之间）

沃兹姬

niwanmao 发表于 2025-5-6 08:47
F4/80有阳性，但是11b的图没看到，没有做成F4/80和CD11b的双参数图吗？

另外，Kupffer细胞的密度大约在1.0 ...

有的倪老师，这是Cd11b和F4/80，gateCd45的图。双阳群基本上没看到

我现在就怀疑会不会是percoll梯度出问题了。通常完整分离肝脏LNPCs的梯度是多少呢，我看大部分都只单独分离淋巴细胞或kuffer细胞

niwanmao

沃兹姬 发表于 2025-5-6 12:27
有的倪老师，这是Cd11b和F4/80，gateCd45的图。双阳群基本上没看到

我现在就怀疑会不会是percoll梯度出 ...

你这里每个通道都有两个抗体混合吗？
F4/80和CD8一个通道，CD4和CD11b一个通道？

沃兹姬

niwanmao 发表于 2025-5-6 15:26
你这里每个通道都有两个抗体混合吗？
F4/80和CD8一个通道，CD4和CD11b一个通道？ ...

没有，因为是两个panel，cd4和cd11b用同一个通道，标注方便而已，实际染色只有f4/80和cd11b。

niwanmao

沃兹姬 发表于 2025-5-6 16:01
没有，因为是两个panel，cd4和cd11b用同一个通道，标注方便而已，实际染色只有f4/80和cd11b。 ...

那么确实没有双阳性细胞。

先优化一下提取吧，更改一下分离液的比例吧