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流式细胞术是免疫学研究中的核心工具，能够精准分析细胞群体的分布与特征。然而，样本处理中的固定步骤（如多聚甲醛）是否会影响结果？一篇发表在《Journal of Immunological Methods》的研究发现：某些免疫细胞在固定后竟“面目全非”。（流式中文网注：仔细看了这篇文章的图，发现对比图的样本差异有些似乎在可控误差范围内，但最后10个样本统计学显示差异较显著，故仅供参考，具体实践中仍建议大家宁可费点时间，做好新鲜样本和固定样本的对照）
研究团队采集了10名健康供血者的外周血样本（3-5 mL，KEDTA抗凝），分为固定组（2% PFA处理）和非固定组，使用包含33种荧光抗体的组合，分析13类免疫细胞及其25个亚群。
染色按照常规进行，固定只涉及到染色后的固定，并非染色前。
- 非固定组：染色后洗涤，弃上清，细胞重悬于100-200 μL FACS缓冲液。
- 固定组：染色后洗涤，弃上清后加入100 μL 4% PFA（终浓度2%），避光固定15分钟，485×g离心洗涤后重悬。
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