光谱流式数据SE问题

Veblen

老师好，最近听光谱流式讲座，说到光谱流式相对于传统流式, 多色实验的SE会显著降低。

请问为什么用光谱流式检测SE（spread error）会降低呢？
Thanks

niwanmao

扩散误差指的是一个染色的细胞群体的荧光会人为地增加另一个未染色或弱染色的细胞群体的方差（扩散）。不管常规流式还是光谱流式，这种情况始终存在，原因就是检测光子时固有的变异性。

光谱流式细胞术有助于减少SE的原因：
1、全光谱采集：常规流式使用一系列二向色镜和带通滤光片，将每种荧光染料发射光谱的特定部分引导到专用的检测器。这意味着大部分光谱信息被丢弃了。但光谱流式使用每个激光器的一系列探测器捕捉每个荧光染料在广泛波长范围内的全部发射光谱，相当于为每种染料创造了一个独特的"光谱特征"或"指纹"。
2、信号分离机制：常规流式依赖于补偿，减去A染料溢出到B检测器中的信号。然而，补偿是基于假设溢出是线性函数，但由于光子检测和光谱形状的复杂性，这并不完全准确。这可能会留下残留的未校正的溢出，并加剧信号扩散。
光谱流式基于它们独特的完整光谱特征（从单色对照获得），采用最小二乘法，将细胞检测到的复合光谱分解成组合中存在的每种已知荧光染料的单独贡献，相当于将光子更精确地分配给其来源荧光染料，本质上减少了导致信号扩散的错误分配。

Veblen

niwanmao 发表于 2025-5-29 08:35
扩散误差指的是一个染色的细胞群体的荧光会人为地增加另一个未染色或弱染色的细胞群体的方差（扩散）。不管 ...

好的，感谢老师。我简单理解一下，传统流式因为只检测发射光的一部分信号，导致补偿调节并无法完全校准染料的溢出；而光谱流式检测的是荧光素的所有发射光的信号，通过算法获取每种荧光素的精确信号，从而得知每种荧光素在全染样本的贡献度。我这样理解应该是可以的吧。