Focusing-光谱流式检测技术问题咨询

Veblen

请教各位老师,单位在考察仪器,就技术问题进行讨论,并不针对某具体样本(算法为最小二乘法):


最近在做光谱流式的测试,遇到以下几个核心问题,请老师指导一下:
1. 11色的实验样本, 唯独有一管单染样本raw data与unmixed后,   unmixed后的荧光强度高于raw data上百倍，整体右移, Why, so confused?其他单染与unmixed后荧光信号与raw data 均接近;
2. 刚开始测单染时, 均未超出检测上限;但上全染样本竟然会出现超出检测上限的情况, 这是为什么? 单染和全染都是同一细胞样本,就是为了单染来看电压是否合适, 结果全染还超限了. 这让我很疑虑, 珍贵样本这样做, 太不友好了.
3. 3激光的光谱流式与5激光的光谱流式, 为什么反而5激光的光谱流式PE信号unmixed后, 其分群远差于3激光?是因为PE同时会被488 与637nm laser都激发吗, 也想不通;
3. 软件功能探索:提供NxN的unmixed图,请问这样的图怎么使用, 也就是一般在哪个门下去看, 去导出NxN的图? 我的理解是在活细胞门下去看, 但是活细胞下很多时候并不"横平竖直",所以又迷糊了;

请老师帮忙解答一下上述问题, 帮助我们更好学习光谱流式的这个新兴的技术,感谢老师.