流式分选/分析Kupffer细胞的“陷阱”

niwanmao

在肝免疫研究的世界里，Kupffer细胞（KCs）是主角级的存在。
这些驻守在肝窦的巨噬细胞，吞噬衰老红细胞、清除细菌、维持免疫耐受——堪称肝脏的“清道夫”。

但实际上，我们定义的F4/80⁺CD11bˡᵒ Kupffer细胞群，其实混进了不少内皮细胞！

01 传统设门的误区：Kupffer细胞≠CD45⁺F4/80⁺CD11bˡᵒ

爱丁堡大学Stephen Jenkins团队用Cdh5-CreERT2 × mTmG报告小鼠做了一个漂亮的实验。
他们发现：在肝组织流式分析中，经典的“F4/80高、CD11b低”设门群体中，有10%左右的细胞是CD31高表达的内皮细胞。

这些细胞看似巨噬细胞，却在显微镜下露出真面目——
CD45⁺F4/80⁺CD31⁺的“双阳”细胞，实为Kupffer细胞残膜紧贴在内皮表面形成的粘连体（doublets）！





02 三种常用分离方法，一致掉进“内皮陷阱”

研究团队对比了三种常用的肝白细胞分离protocol：

• 300 g双离心法
  

2. 33% Percoll梯度法
3. 50 g慢速预离心法

不论哪一种，都能在KCs群中看到“伪Kupffer细胞”——即CD31⁺污染。
而且，Percoll法虽然被广泛使用，却带来了最严重的细胞丢失和比例偏倚。

统计结果：

• Percoll法获得的Kupffer细胞数比300 g法少7倍以上；
  

* Ki67阳性比例、骨髓嵌合结果均被高估。

这意味着，一篇流式分析论文中，如果没有写明“是否设排CD31”，结论可能值得再审视。


03 爱丁堡团队的“protocol”

游客，本帖隐藏的内容需要积分高于 55 才可浏览，您当前积分为 0