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做免疫实验的小伙伴，谁还没“养”过巨噬细胞？
作为我们固有免疫和适应性免疫中的关键角色，巨噬细胞简直是免疫界的“变形金刚”。它们的可塑性极强，能根据周围环境信号，极化成不同的功能亚型。
最经典的分型，莫过于M1（经典活化）和M2（替代活化）了。
- M1型： 促炎“战斗机”，负责抗肿瘤、杀病菌。
- M2型： 抗炎“维修工”，负责组织修复、伤口愈合。
为了研究它们，大家通常会从健康人外周血中分离纯化出单核细胞，用M-CSF诱导7天，获得人单核细胞衍生的巨噬细胞（MDMs）。
然后，用不同的“鸡尾酒”去刺激它们，使其极化成不同的亚型：
- M1： LPS + IFN\gamma
- M2a： IL-4
- M2c： IL-10
听起来很简单？但魔鬼藏在细节中。
一个灵魂拷问：你一般在刺激后第几小时去收样检测？
是6小时？24小时？还是48小时？
我们经常发现，文献A说24小时能看到某标志物高表达，文献B说48小时才行，而你自己的实验结果却是阴性……
为什么？
因为目前为止，对于这些标志物检测的“最佳时间点”，业内根本没有统一标准！
巨噬细胞的极化是一个高度动态的过程，不同标志物的表达模式（mRNA和蛋白）随时间变化极大。如果你在“次优”时间点检测，很可能得到“假阴性”结果，这不仅浪费时间，更可能让你与真相失之交臂。
为了解决这个大难题，土耳其Duygu Unuvar Purcu等人做了一件“功德无量”的事：他们把M1、M2a、M2c的所有常用标志物，在4h, 8h, 12h, 24h, 48h, 72h 这一系列时间点上，从mRNA到蛋白水平（流式、ELISA）全都测了一遍！
今天，我们就来“抄一下作业”。
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