流式补偿干到250了！

Nicoctor

这是我目前使用的panel

panel

知道BV510和BV421可能会串得比较厉害，但是没想到这么夸张，对BV421的串色特别明显，而且需要超高的补偿，这是调了补偿之后



如果不调补偿就是这样



调整补偿之前，散点图是这样子的


调整补偿之后，散点图是这样的



想请教一下站里的大佬们，这种情况是得换抗体还是说就这样调补偿就行？此为，尽管调了补偿，在某些样本中，CD3阴性的细胞群为什么还是这么奇怪


有个沿着对角线方向的小尾巴，这是补偿调得不够还是怎么回事，圈CD3阴性群要不要把这个尾巴圈进去？这是FMO-CD3管，也有这个小尾巴


多谢站内大佬的答疑解惑，学到了很多，但还是有很多不太懂的地方。

Nicoctor

发现这对角线上面的细胞确实很多是B220阳性的，那应该就是补偿调得还不够？直接这样圈可以吗？

wxd

从你给的图上看，是V450通道的电压太高导致对它的补偿过高。正常情况下，补偿调整完毕后，你展示的这个单染管细胞群在V450通道上应该位于V450坐标轴上10^3左侧。

ZRX

原始数据发上来看看

Nicoctor

wxd 发表于 2025-11-28 09:04
从你给的图上看，是V450通道的电压太高导致对它的补偿过高。正常情况下，补偿调整完毕后，你展示的这个单染 ...

你好，当时上机的时候CD3分群不太明显，所以电压给得高了，但是从串色逻辑上来说，是CD45-BV510串到了CD3-BV421上，如果补偿难调，应该是CD45的电压给高了？不知道我的理解对不对

Nicoctor

ZRX 发表于 2025-11-28 09:12
原始数据发上来看看

这个网站如何分享原始数据呀

niwanmao

Nicoctor 发表于 2025-11-28 10:13
这个网站如何分享原始数据呀

回复的时候，点击编辑框右上方的「高级模式」，可上传附件，但是建议压缩成zip包

wxd

Nicoctor 发表于 2025-11-28 10:12
你好，当时上机的时候CD3分群不太明显，所以电压给得高了，但是从串色逻辑上来说，是CD45-BV510串到了CD3 ...

你理解的不对。从串色逻辑上讲，CD45-BV510的荧光串到BV421上，因为BV421的电压太高，导致BV421通道的光电倍增管或者其他类型的检测器对BV510渗漏到BV421的荧光灵敏度过高，从而导致补偿过高，所以是BV421通道的电压太高了。CD3分群不明显，可能是CD3抗体用量不够导致的，加大CD3的用量试试。

Nicoctor

wxd 发表于 2025-11-28 17:31
你理解的不对。从串色逻辑上讲，CD45-BV510的荧光串到BV421上，因为BV421的电压太高，导致BV421通道的光 ...

受教了，谢谢大佬。