流式检测巨噬细胞吞噬功能试验

zark_00 · 发表于 2012-2-19 16:47:44

为检测巨噬细胞吞噬功能，按照查文献所得，用鸡红细胞吞噬试验来检测，结果重复性不高，主观性较强，准备采用某些文献中所讲的流式检测。
有文献说用CFSE染鸡红细胞，用CD11b标记巨噬细胞，按10:1（鸡：巨）混合孵育后上机检测，用CD11b圈定巨噬细胞后，在CFSE的直方图上会看到，对照组仅有CFSE阴性峰（无吞噬，无鸡红细胞），实验组有阴性峰同时有阳性峰，由阳性峰的荧光强度可算出吞噬率。请问有道友是否用过该方法，效果如何？
还有本论坛有战友提问过用Dextran FITC 与巨噬细胞孵育后，直接用流式检测FITC。。。请问有较详细的流程么，目前我还没有找到，同样，不知道效果如何？
谢谢各位

niwanmao · 发表于 2012-2-19 21:43:03

巨噬细胞的功能测定还真没做过，帮你找到一篇冷泉港(cold spring habor）的protocol，其中详细描述了骨髓来源的巨噬细胞的分离、功能鉴定等方法，不知道是否符合你的需求？

请见附件。

BMM.pdf (160.76 KB, 下载次数: 135)

zark_00 · 发表于 2012-2-19 23:45:51

本帖最后由 zark_00 于 2012-2-19 23:58 编辑

晕，站长大人，我权限不够20，无法阅读下载。。。非常感谢，呵呵

niwanmao · 发表于 2012-2-20 08:43:03

zark_00 发表于 2012-2-19 23:45

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晕，站长大人，我权限不够20，无法阅读下载。。。非常感谢，呵呵

够的啊。你现在是注册会员了啊。

zark_00 · 发表于 2012-2-20 09:14:54

现在已经是了，已经下载了，文献中没有讲吞噬功能的测定，我再找找吧，有什么进展会继续发帖的。

niwanmao · 发表于 2012-2-20 09:17:17

zark_00 发表于 2012-2-20 09:14

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现在已经是了，已经下载了，文献中没有讲吞噬功能的测定，我再找找吧，有什么进展会继续发帖的。 ...

第4页就是啊Phagocytosis Assay (Fig. 1B)。他这里是利用酵母素A来做的。

叶绿素 · 发表于 2012-2-20 15:52:16

有同学分别用大肠杆菌和beads做过，大肠杆菌和beads都是自带荧光的。

叶绿素 · 发表于 2012-2-20 15:54:01

你的是什么的巨噬细胞？我做过有小鼠贴壁的，还有悬浮的，悬浮的用的是beads就是荧光微球，小鼠贴壁的用的是大肠杆菌。

zark_00 · 发表于 2012-2-20 21:35:42

叶绿素发表于 2012-2-20 15:54

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你的是什么的巨噬细胞？我做过有小鼠贴壁的，还有悬浮的，悬浮的用的是beads就是荧光微球，小鼠贴壁的用的 ...

能不能分享下实验过程啊，你用的是Molecular Probes的微球？

zark_00 · 发表于 2012-2-20 21:36:46

小鼠腹腔巨噬细胞，原代.....

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[功能检测] 流式检测巨噬细胞吞噬功能试验

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