流式分选和磁珠分选比较

gcz5340

       应管理员要求，我来比较一下流式分选和磁珠分选的优缺点，本来想列一个表，但表格可能表述不清楚，还是用通俗的语言写啊，个人体会欢迎拍砖。

简单说一下原理：
       现在流式分选一般都是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。
       磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞过柱子（柱子周围连磁铁），带磁珠的细胞就留在柱子上，不带磁珠的细胞就流走了，从而实现分选。

现在可以比较不同了：
       1、对细胞的刺激。 我觉得磁珠分选最大的优势就是对细胞的刺激要小一点。因为流式分选细胞首先要经过几十微米的喷嘴，然后要被充电，还要经过几千伏的电场，最后以几十米每秒的速度落到收集管里面，有些原代细胞就受不了，分选免疫细胞也要考虑细胞活化的影响；而磁珠分选相对来说就对细胞没什么刺激。
       2、设备要求。 磁珠分选小的实验室就能做，买一些专用的磁铁和柱子就可以了，而流式分选就需要分选型的流式细胞仪，都是几百万以上的。对操作员的要求来说，流式分选也要高一点，需要专门培训，需要注意的细节也要多很多。
当然如果你周围有什么流式平台的话，磁珠分选和流式分选的成本应该是差不多的，流式分选一次大约1-2千（各地方不同），磁珠分选的柱子磁珠差不多也要烧这么多钱。
       3、试剂不同。 这个最好理解，流式分选用的是荧光素偶联的抗体，磁珠分选用的是磁珠结合的抗体。

下面就要说下流式分选的优势了：
       4、分选纯度。这个肯定是流式分选的纯度高，磁珠分选如果操作好的话也能达到80-90%的纯度，但流式分选一般都能达到90％以上（样本制备和仪器条件正常的条件下）。
       5、多参数分选。流式细胞术很大的优势就是多参数，比如我可以分选CD4+CD25+CD127low的Treg，三色的一次就能分选。磁珠分选就必须先分CD4，再分CD25，更多参数的就没法进行。
       6、低表达群细胞分选。比如有些干细胞它的表达比例只有百分之零点几，比例太少磁珠分选无法操作，流式就可以把这些细胞富集起来。
       7、胞内荧光分选。流式分选在分子生物学中很大一部分应用就是分选GFP、YFP等阳性细胞，还有可以用Hoechst染精子的单倍体进行分选，这些针对胞内成分的分选也是磁珠分选无法实现的。

       另外要说明的是，现在都很流行磁珠分选和流式分选相结合的方法，像上面举的例子分选CD4+CD25+CD127low的Treg，如果仅用流式分选可能时间太长，纯度也有影响。那么可以选择先用磁珠纯化出CD4阳性的细胞，再过流式分选CD4+CD25+CD127low的群体，这样既节省了时间保证了活性，也可以提高分选的纯度。

       以上就是我能想到的了，欢迎大家补充。

CRP

我不了解流式分选，但是美天旖的磁珠我倒是用了2年了，分选的Naive T纯度95%以上，80-90%有点少，是不符合实验要求的。我觉得他更大的好处是，比较能保证无菌，适合后期细胞的再培养，而且分选量比较大。

niwanmao

非常感谢郭老师的精彩评述，看了非常清楚。

在这里顺便问一个入门的问题，上面说道流式分选的原理是利用电荷，假如我们要分选A标记阳性的细胞，难道是标记上A抗体之后，设门，机器自动给A抗体阳性的细胞加上电荷，其它细胞不加电荷？是这样吗？

stef1981

niwanmao 发表于 2012-3-1 08:25

                               
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非常感谢郭老师的精彩评述，看了非常清楚。

在这里顺便问一个入门的问题，上面说道流式分选的原理是利用电 ...

不想要的细胞就不加电荷
另外，还可以设两个门，同时分选两群细胞，一群加上正电荷，一群加上负电荷，在电场里向不同的方向偏转

niwanmao

stef1981 发表于 2012-3-1 09:16

                               
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不想要的细胞就不加电荷
另外，还可以设两个门，同时分选两群细胞，一群加上正电荷，一群加上负电荷，在 ...

如果三群呢？：）

stef1981

niwanmao 发表于 2012-3-1 10:19

                               
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如果三群呢？：）

有可以同时四群细胞分选的机子，没见过

niwanmao

stef1981 发表于 2012-3-1 10:30

                               
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有可以同时四群细胞分选的机子，没见过

分两群是利用正、负电荷，分三群或四群的原理是什么啊？

gcz5340

       楼上的说的很对啊，我再补充详细点。
       首先要说明的是，流式分选直接分选的是液滴，本来鞘液包裹着细胞流是连续的液流，经过高频率的振荡器被断裂成一个一个独立的小液滴，理想的情况下，每个液滴里面就包裹着一个细胞（当然还存在一个液滴里面有几个细胞的情况，这就涉及到分选模式的问题了，不详述），如果这个液滴里面的细胞是目标细胞，机器就会在液滴离开液流的一瞬间给它充个电荷。
       至于机器是怎么给它充电荷，充多少电量的电荷，我们不需要管，只需要设置好就可以了，比如我们BDAriaII有一个sort layout窗口，如果你想分选FITC、PE、APC和PerCP-Cy5.5四个population（四路分选），你就在窗口里设置好（如图），机器就会自动给相对应的液滴充上电性和电量不同的电荷，使其偏转到左一、左二、右一、右二接收管里。
       写的很哆嗦，不知道说清楚没有。

gcz5340

niwanmao 发表于 2012-3-1 10:34

                               
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分两群是利用正、负电荷，分三群或四群的原理是什么啊？

电量不同啊，一个正电荷和两个正电荷偏转的幅度肯定不一样啊。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-3-1 10:49

                               
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楼上的说的很对啊，我再补充详细点。
       首先要说明的是，流式分选直接分选的是液滴，本来鞘液 ...

看到这个面板截图就有点懂了，这机器可真是够聪明的。