关于PROCOUNT

luxj807 · 发表于 2012-5-15 11:14:17

朋友们,大家好:
请问有FLOWER用过BD的PROCOUNT试剂盒吗?是不是有一个配套软件?谢谢!

niwanmao · 发表于 2012-5-15 11:50:05

没用过，但看过相关说明。
是想问操作步骤吗？

配套软件是有的，名称也叫“PROCOUNT”。机器附带的。

luxj807 · 发表于 2012-5-15 12:03:21

niwanmao 发表于 2012-5-15 11:50

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没用过，但看过相关说明。
是想问操作步骤吗？

谢谢老师,我在网上找的操作步骤大都是分析,我想找具体的设门步骤.谢谢老师.

niwanmao · 发表于 2012-5-15 12:46:45

luxj807 发表于 2012-5-15 12:03

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谢谢老师,我在网上找的操作步骤大都是分析,我想找具体的设门步骤.谢谢老师. ...

BD官方的procount试剂盒说明书第9页里面其实讲了，见附件：https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIwM3xmOGJiMmIzNXwxNzE1MDQ0MzI1fDB8

主要是画3个图：
– nucleic acid dye vs SSC
– CD45 PerCP vs SSC
– Two displays of nucleic acid dye vs CD34 PE (the second display will be gated on R1 and R2)

第一个图用来排除死细胞，第二个图是参照ISHAGE方案，选择CD45弱阳性、SSC小的细胞群，第三个图是画两个核酸染料/CD34的散点图，分别用来分析干细胞和微球。

下面我帮你简要翻译一下：
1、在核酸染料－SSC散点图上，先画淋巴细胞门R1、有核细胞门R6，有效排除死细胞。

淋巴细胞门R1、有核细胞门R6

2、CD45－SSC散点图上，画R2：CD45弱表达细胞（这是我们需要的干细胞特征）；R4：微球；R7：CD45阳性细胞

R2：CD45弱表达细胞；R4：微球；R7：CD45阳性细胞

3、在核酸染料－CD34散点图上，并把gate设为R1 AND R2，画R3：CD34＋造血干细胞：

R3：CD34＋造血干细胞

这样，R1 AND R2 AND R3就是造血干细胞（#CD34 cells）

4、另外画一个核酸－CD34散点图，把GATE设为R4，画微球的门R5，这样R4 AND R5就是微球（#beads）：

微球

5、最后，按照计算公式计算绝对数：
#CD34 cells和#beads就是上面算出来的CD34＋细胞和微球占总数的百分比

计算公式

一成天 · 发表于 2012-5-18 16:46:02

procount法，对于全血标本中WBC计数很少的标本，貌似CV值较大，而且想获取6万个有核细胞也比较困难，常常标本跑完了也不能获取足够细胞，对于单采后的细胞标本较理想。

niwanmao · 发表于 2012-5-18 17:41:23

一成天发表于 2012-5-18 16:46

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procount法，对于全血标本中WBC计数很少的标本，貌似CV值较大，而且想获取6万个有核细胞也比较困难，常常标 ...

是啊。我平时做双平台法的时候，做过动员采集的干细胞细胞数足够，但如果普通的外周血，可能就需要离心浓缩了。

一成天 · 发表于 2012-5-20 13:33:08

niwanmao 发表于 2012-5-18 17:41

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是啊。我平时做双平台法的时候，做过动员采集的干细胞细胞数足够，但如果普通的外周血，可能就需要离心浓 ...

请问倪老师，离心浓缩后，结果会不会偏高啊？具体如何操作，盼教我，{:3_46:}

niwanmao · 发表于 2012-5-20 13:38:49

一成天发表于 2012-5-20 13:33

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请问倪老师，离心浓缩后，结果会不会偏高啊？具体如何操作，盼教我， ...

如果是绝对计数，在稀释或浓缩时，就得注意记住稀释或浓缩的比例，以便计算原来的数值。

由于我们平时节约成本起见，用双平台法，我们只要计算比例就行，所以我觉得百分比是不会有问题的，因为离心后去掉的就是上清，要丢失细胞也是所有细胞一起丢失。

你们可能是用单平台绝对计数吧？那可能浓缩的影响比较大。

aninawang · 发表于 2016-4-28 19:25:38

nucleic acid dye 是在哪个通道？还是都可以？

aninawang · 发表于 2016-4-28 20:09:23

niwanmao 发表于 2012-5-20 13:38
如果是绝对计数，在稀释或浓缩时，就得注意记住稀释或浓缩的比例，以便计算原来的数值。

由于我们平时节 ...

倪老师：nucleic acid dye 是在哪个通道？还是都可以？

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