第一次做CFSE增殖检测，想请倪老师帮忙看下数据，非常感...

六轮花开

麻烦倪老师帮忙看看这6个实验管的情况，测的时候初看只有6和8有双峰，但是我不确定是不是分代峰，因为只有这两管里包含两种细胞，APC和脾淋巴细胞，可是只有脾淋巴细胞是染了CFSE的呀，请问倪老师这两管是增殖了吗？如果是，增殖有差异吗？第一次做，还没学会软件使用，但是很想知道这次结果怎么样，谢谢老师！


12-12号
1-空白管
2-CD25-PE 单染
3-Foxp3-PE-Cy5 单染
4-IgG-PE-Cy5 同型对照
5-CFSE 单染
6-10管为实验管。都染了CFSE,CD25 和Foxp3

CD25好像染的不太好。我很想知道这次细胞增殖的数据是不是可用。另外看CD25+Foxp3+和CD25-Foxp3-两群细胞分别的增殖情况怎样。麻烦倪老师了！！非常感谢！！

niwanmao

顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光都没有。
其它几管如果按照2作为父代，还是可以拟合出来的，但是不明显。

六轮花开

niwanmao 发表于 2012-12-10 20:47

                               
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顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光 ...

哦哦是的，第3管只有没染CFSE的APC细胞，是阴性对照。倪老师觉得增殖不明显是不是因为培养时间不够长？这是染CFSE后培养3天测的，同一批处理的细胞还有复孔，我打算培养第5天的时候再去测，到时候再看看数据怎么样？谢谢倪老师~

niwanmao

六轮花开 发表于 2012-12-10 21:09

                               
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哦哦是的，第3管只有没染CFSE的APC细胞，是阴性对照。倪老师觉得增殖不明显是不是因为培养时间不够长？这 ...

这个条件很难说，多数情况下都很难做到象说明书上那么典型的，不知道你这个幻灯片看过没有？
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1969-1-1.html
里面讲得非常详细，可以参考和琢磨一下

六轮花开

niwanmao 发表于 2012-12-10 15:48

                               
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顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光 ...

倪老师，我今天又把培养5天的细胞测了流式，这次上机前另外又染了CD25和Foxp3.希望倪老师能帮我看一下这次的增殖明显吗，数据可用吗？非常感谢！这里不能传附件，我放在楼顶了~

niwanmao

六轮花开 发表于 2012-12-12 16:18:52

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-12-10 15:48 [url=forum.php?mod=redirect&g

你可能用的是快捷回复的窗口，要上传附件，需要点击窗口右上的“高级模式”，进入高级编辑窗口，就可以了。

数据现在暂时没办法看，等会儿回去再帮你分析看看。

niwanmao

六轮花开 发表于 2012-12-12 16:18

                               
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倪老师，我今天又把培养5天的细胞测了流式，这次上机前另外又染了CD25和Foxp3.希望倪老师能帮我看一下这 ...

以第10管为例，可以看到，绝大多数都是CD25－FOXP3－的细胞：
CD25-foxP3-的增殖

CD25-foxP3-的增殖

而CD25＋foxP3-的细胞很少，见下面CD25＋foxP3-的增殖图，这样就造成模型在拟合上准确性不佳。至于CD25＋foxP3＋这群双阳性的Treg更是几乎看不到了。

CD25＋foxP3-的增殖

我个人建议的解决方法是：
如果你的目的就是分析CD25+的细胞，那么建议在获取时，可以只获取CD25＋那群细胞，并使其细胞总数尽可能达到2－3万以上。

六轮花开

niwanmao 发表于 2012-12-12 22:35

                               
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以第10管为例，可以看到，绝大多数都是CD25－FOXP3－的细胞：
CD25-foxP3-的增殖

我昨天染的CD25不太好，没怎么染上。用的ebioscience的 Treg细胞试剂盒，原来这个试剂盒染的一直不错的。今天再重新染一下看看。真是麻烦您了，非常非常感谢！另外，我昨天的数据如果不分细胞群，单看脾淋巴细胞的增殖的话，增殖明显吗？第8管和第10管有差异吗？谢谢您！

niwanmao

六轮花开 发表于 2012-12-13 09:47

                               
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我昨天染的CD25不太好，没怎么染上。用的ebioscience的 Treg细胞试剂盒，原来这个试剂盒染的一直不错的。 ...

晚上回去看看，现在用的是公用电脑。

六轮花开

这是今天染了测的，跟昨天的10管对应的完全一样。最后的一批复孔了，测的时候获的细胞比较多，不知道跟昨天相比结果有没有好一点。麻烦倪老师了！真的非常感谢！