干细胞解冻复苏加入7-AAD的时机

红猫先生 · 发表于 2013-1-31 22:53:37

各位老师好！！
我做干细胞标记好CD34&CD45，临上机前加入7-AAD孵育10min后立即上机检测，结果测出的细胞活性才只有50%左右，活的CD34+ 更低。我有疑问：
1.是不是我加入的时机不对？请问各位老师如果有做7-AAD的，是什么时候加入的呢？
2.加入7-AAD后还需不需要PBS洗涤呢？我两种都做了，觉得洗涤后值会高一点点。
最后，祝各老师新年快乐！！

niwanmao · 发表于 2013-2-1 09:50:00

请参见BD stem cell kit的幻灯（第18页），可见是CD34、CD45、7-AAD、标本一起加的。我们平时做干细胞检测由于历史原因，一直没加7-AAD，所以只能给你这个参考。我觉得这个方法还是合理的，虽然这是一个免洗方案，但一起加进去标记后，后面的裂解步骤其实就类似于洗涤了。
这个幻灯很详细的从干细胞检测方案的演化、试剂盒的介绍、标准流程和方法的介绍，虽然其中不乏一些商业性的内容，但这些标准流程、标准设门对我们还是有参考意义的。

干细胞绝对计数分析设门流程

干细胞绝对计数分析设门流程

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